酶工程 第五章 酶改性基本理论——酶结构及其及催化特性关系 2013-2.ppt

第五章 酶改性的基本理论——酶的结构及其与催化特性的关系 第一节 酶的化学组成 第二节 酶的化学结构 第三节 酶的空间结构 第四节 酶的活性中心 第五节 酶的结构与催化特性的关系 第一节 酶的化学组成 一、蛋白类酶的基本组成单位——氨基酸 氨基酸结构 肽键 二、核酸类酶的基本组成单位——核苷酸 碱基+核糖+磷酸=核苷酸 3’,5’-磷酸二酯键 三、酶的辅因子 单成分酶：仅有蛋白质或核糖核酸组成的酶 双成分酶：除了蛋白质或核糖核酸外，还有其他非生物大分子成分的酶。 1. 无机辅因子 金属离子的作用： 参与催化反应 、稳定酶的构象。 1. 无机辅因子 2. 有机辅因子 是指双成分酶中相对分子量较小的有机化合物。它们在酶催化过程中起着传递电子、原子或基团的作用。 (1)传递电子体：如 卟啉铁、铁硫簇； (2)传递氢（递氢体）：如FMN/FAD、NAD+/NADP+、CoQ、硫辛酸； (3)传递酰基体：如 CoA、TPP、硫辛酸； (4)传递一碳基团：如 四氢叶酸； (5)传递磷酸基：如 ATP，GTP； (6)其它作用： 转氨基，如 磷酸吡哆醛（VB6） ；传递CO2，如 生物素。 (1) 烟酰胺核苷酸(NAD+， NADP+) B族维生素 许多脱氢酶的辅因子：乳酸脱氢酶、醇脱氢酶、谷氨酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶 NAD+：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，辅酶I 一般与呼吸链相连，与分解反应偶联：（醇脱氢酶催化伯醇脱氢生成醛） R—CH2CH2OH+NAD+=R—CH2CHO+NADH+H+ NADP+：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，辅酶Ⅱ 。 一般与合成反应相偶联。 (2) 黄素核苷酸(FMN和FAD) 维生素B2(核黄素)的衍生物 各种黄素酶(氨基酸氧化酶、琥珀酸脱氢酶等)的辅助因子 FMN：黄素单核苷酸 FAD：黄素腺嘌呤二核苷酸 FMN和FAD的主要作用是传递氢。 (3)铁卟啉 铁卟啉是一些氧化酶（如过氧化氢酶、过氧化物酶等）的辅助因子。 它通过共价键与酶蛋白牢固结合 。 (4)硫辛酸 硫辛酸全称为6,8-二硫辛酸。它在氧化还原酶的催化作用中，通过氧化型和还原型的互相转变而起传递氢的作用 。 (5)核苷三磷酸(NTP) 腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)、鸟苷三磷酸(CTP)、胞苷三磷酸(CTP)、尿苷三磷酸(UTP)等。它们是磷酸转移酶的辅助因子。 (6)鸟苷 鸟苷是含Ⅰ型IVS的自我剪接酶(R-酶)的辅助因子。 (7) 辅酶Q 辅酶Q是一系列苯醌衍生物 一些氧化还原酶的辅助因子。 (8) 谷胱甘肽(GSH) L-Glu—L-Ile—L-Gly三肽 (9) 辅酶A （CoA） 辅酶A是各种酰基化酶的辅酶，由一分子腺苷二磷酸、一分子泛酸和一分子巯基乙胺组成。 (10)生物素 生物素是维生素B的一种，又称维生素H 生物素是羧化酶的辅助因子，在酶催化反应中，起CO2的渗入作用。 (11) 硫胺素焦磷酸(TPP) 即维生素B1，是酮酸脱羧酶的辅助因子。 (12)磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺 即维生素B6，是各种转氨酶的辅助因子。 在酶催化氨基酸和酮酸的转氨过程中，维生素B6通过磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺的互相转变，起到氨基转移作用 第二节 酶的化学结构 一、酶蛋白的化学结构 即一级结构，是指蛋白质中的氨基酸按照特定的排列顺序通过肽键连接起来的多肽链结构。 氨基酸的种类和数目 氨基酸的排列次序 二硫键的数目和位置 肽链的数目等。 每种蛋白质都由唯一而确定的遗传信息决定氨基酸序列 一级结构决定蛋白质的高级结构 氨基酸：20种 α-氨基酸 L-型和D-型 肽：一个氨基酸的α-羧基和另一个氨基酸的α-氨基脱水缩合而成的化合物。 肽键（peptide bond）：一个氨基酸的α-COOH 和相邻的另一个氨基酸α-NH2脱水所形成的共价键。 肽单位： 二硫键 ：2个Cys的巯基脱氢联结而成 酶蛋白化学结构的测定 （1）酶蛋白的分离纯化（纯度＞97％） 沉淀、离心、电泳、层析等等 （2）氨基酸种类和数目的确定 蛋白质水解后用层析技术等分离鉴定。氨基酸自动分析仪 （3）肽链数目的确定 通过末端分析等方法测定肽链的数目 通过还原法打开二硫键 在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，防止重新被氧化。 （4）氨基酸顺序测定 酶蛋白不完全水解→各种小肽→末端分析→综合分析 末端分析 二硝基氟苯（FDNB）法（N-末端分析） 肼解法（C-末端分析） 二、酶RNA的化学结构 酶RNA的化学结构主要包括组成RNA的核苷酸种类、数目和排列顺序。 4种核苷酸：AMP，GMP，CMP，UMP 3’-5’磷酸二酯键连接 酶RNA化学结构的测定 核酸自动测序仪