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山银花多糖提取工艺参数优化 　　摘要：采用苯酚-硫酸法测定山银花（Lonicera hypoglauca）多糖的含量，并对提取工艺进行优化。在单因素试验的基础上，采用L9（34）正交试验，以山银花多糖提取率为指标，探讨了提取次数、提取温度、提取时间、料液比对山银花多糖提取率的影响。结果表明，最佳提取工艺参数为提取4次、提取温度80 ℃、提取时间150 min、料液比1∶20（g∶mL）。在此条件下，山银花中多糖平均提取率为15.39%，加样回收率为97.70%，该方法提取山银花多糖操作简便、准确度高、重现性好，可作为山银花多糖提取和含量测定的方法。 　　关键词：山银花（Lonicera hypoglauca）；多糖；苯酚-硫酸法；正交试验 　　中图分类号：S567.1+9；R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）10-2466-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.10.043 　　山银花（Lonicera hypoglauca）别名大银花、金因花（哈尼族名）、棒早瓜（苗族名），为忍冬科菰腺忍冬干燥的花蕾或带初开的花[1]。它味甘、性寒，是临床中常用中药，药用价值很高，具有清热解毒、疏散风热的功效，常用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病等。山银花在中国资源丰富，分布于全国各省，它具有抗病原微生物、抗炎、抗氧化、保肝、抗肿瘤、免疫调节与抗动脉粥样硬化等方面的活性，在民间使用较为广泛，是多种中成药的主要原料。近年来，山银花还被广泛应用于食品、饮料、保健品、化妆品和兽医用等方面。据文献报道，山银花的化学成分主要有挥发油类、黄酮类、有机酸类和苷类等[2]。 　　多糖（Polysaccharide）是由许多相同或不同的单糖以糖苷键聚合而成的高分子化合物，它是自然界中储量丰富的生物聚合物，主要包括植物多糖、动物多糖以及微生物多糖3类[3]。植物多糖具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒、抗衰老、抗疲劳以及抗凝血、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘及降血压等[4-8]多种生物活性及药理作用，很可能是山银花免疫调节和抗癌抗肿瘤的有效成分之一。目前，有关山银花多糖含量测定及提取工艺研究尚未见报道。试验采用水提醇沉法对山银花中多糖进行提取，通过有关显色反应对提取物进行定性鉴定，用苯酚-硫酸法测定其多糖含量，通过正交试验对提取工艺进行了优化，旨在为山银花的药学价值研究提供参考并为其进一步开发利用提供基础数据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　山银花采自云南省双柏县衰牢山，经鉴定为忍冬科植物；葡萄糖标准品（≥98%）、石油醚（沸程30～60 ℃）、三氯乙酸、95%乙醇、苯酚、蒽酮、α-萘酚、浓硫酸等均为分析纯。 　　722S型分光光度计（上海青华科技仪器有限公司）、HH-S2s型恒温水浴锅（金坛市大地自动化仪器厂）、电子天平（奥豪斯仪器）、12B5型台秤（成都天平仪器厂）、SHZ-ⅢA型循环水真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）、远红外快速恒温干燥箱（鄄城威瑞科教仪器有限公司）。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 试验材料处理 样品依次用自来水、去离子水洗净风干后放入远红外快速恒温（55 ℃）干燥箱中烘干，粉碎后过40目筛，得山银花干粉。将山银花干粉用折叠成筒状的滤纸装好置于索式提取器中，加入石油醚冷浸48 h，然后置于75 ℃水浴中，使其微沸回流反复提取，直至提取液澄清为止，取出冷却至室温。用减压抽滤，滤渣用石油醚充分洗涤后，风干至石油醚全部挥发，得到去除色素和油脂的山银花，烘干后密封保存，备用。 　　1.2.2 山银花多糖的提取 准确称取去除色素和油脂的山银花干粉5.00 g，置于250 mL烧杯中，加入125 mL去离子水，置于80 ℃恒温水浴锅中加热120 min后。减压抽滤，浓缩滤液，往滤液中加入等体积的3%三氯乙酸除去山银花中的蛋白质，摇匀、静置过夜，离心除去沉淀，再往滤液中加入4倍体积的95%乙醇沉淀多糖，静置24 h，将醇沉后的白色絮状物进行离心，得山银花多糖粗提物，用去离子水溶解多糖粗提物，得供试品溶液，备用。 　　1.2.3 山银花多糖的鉴定 取2 mL供试品溶液3份，分别加质量分数为5%苯酚溶液1 mL和硫酸溶液2 mL，浓度为2 g/mL蒽酮-硫酸溶液4 mL，质量分数为0.5% α-萘酚溶液1 mL和浓硫酸溶液2 mL，进行显色反应，观察试验现象，检验有无多糖[9，10]。 　　1.2.4 山银花多糖含量测定 　　1）葡萄糖标准溶液的制备。准确称取105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖标准品100.00 mg，用去离子水溶解摇匀，并定容至100 mL容量瓶中，得浓度为1.00