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常用特殊染色技术及其质量控制 徐开军 云南省第三人民医院病理科 染色结果： 黑色素被脱色 注意事项及个人见解： 1、高锰酸钾水溶液以新配为佳，太陈旧的氧化力弱，脱色 效果也随之欠佳。 2、酸化高锰酸钾水溶液脱色效果较好，但是高锰酸钾氧化 及草酸漂白处理时间不能过长，过长可使切片脱落。切 片在4-5um为佳，过厚也容易脱片。 关于免疫组化染色之前脱黑色素的方法： 可按照处理常规染色方法进行处理，时间应该调节好，须细 心操作，防止切片在免疫组化染色抗原修复过程中脱片。 千万不可在DAB显色复染之后进行高锰酸钾脱黑色素及草酸漂 白 关于免疫组化染色后区别黑色素的复染方法： 1、按照免疫组化染色步骤操作，至DAB显色后，水洗。 2、滴加Giemsa工作液，20-30min，自来水洗。 3、1:500（1ml冰醋酸+500ml蒸馏水）冰醋酸分化，至黑色素 呈绿色为止，显微镜观察 4、水洗后常规脱水、透明及封固。 特殊染色结果判读 所选择染色方法表达结果、对照染色的结果、生物学形态。结合三者判断，才是可靠的结果。 1、特殊染色方法多重选择性，所选择染色方法结 果阳性表达结果，定位清晰准确。 2、染色结果必须建立在组织阳性对照或内对照有 效的基础上。 3、判断染色结果时，应准确认识生物学形态。 肝糖原染色： 所选择方法：PAS法 对照：糖原阴性 生物学形态：细胞质内，颗粒状 内对照 真皮纤维瘤含铁血黄素染色： 所选择方法：亚铁氰化钾法 对照：阳性 生物学形态：金黄色或黄棕色 大小不等颗粒 阳性对照 特殊染色质量控制 1、阳性对照 2、阴性对照 3、内对照 1、方法的选择 2、染液配制后的验证 3、染液的保存 1、染色掌握 2、染色性质了解 染色控制 染色液配制、保存 对照的设立 结果 质量控制 一、对照的设立 对照是首要条件 可确保染色试剂的有效、染色方法的可靠、操作的 规范 最终证实染色结果的可靠 1、阳性对照 已知含有所染色物质的标本 病原微生物的染色中，设立阳性对照是非常有必要的，原则上缺阳性对照的染色结果不能作为诊断结果。 2、阴性对照 已知不含有所染色物质的标本 一般来讲，特殊染色阳性结果比阴性结果更有意义。 阴性结果可能缘于许多因素，可能源于固定液对组织的影响、物质含量低、组织处理时的影响、染色方法不敏感或操作有误等引起的。 3、内对照 阻断或消化的方法 组织自身物质 消化对照 糖原：单纯多糖，功能结构与 植物淀粉相似，故又称动物淀粉。 PAS染色，淀粉酶或唾液消化处理。 对照片经消化后PAS染色阴性是糖原。 自身对照 真菌 鼻窦真菌病PAS染色，组织腺体分 泌黏液物质呈红色作为最佳对照。 二、染色液配制、保存 染色液的配制对于染色至关重要 网状纤维染色银氨液的配制是染色成败的关键 含铁血黄素染色亚铁氰化钾溶液染色前新鲜配制效果更佳理想 1、方法选择 特异性高 染液配制越新鲜 染色效果越好 真菌： PAS法：显示大多数真菌（广泛采用的常规方法） GMS法：曲霉菌、毛霉菌 AB（pH2.5）：主要应用于新型隐球菌 2、染液配制后的验证 严格按照染液配制过程配制 染液配制后进行验证 做阳性、阴性对照，确保染液有效。 验证有效后必须在瓶上贴上标签，标注： 试剂名称、配制日期、有效期 3、染液的保存、有效期 不是所有试剂都在4°C冰箱保存 易氧化还原试剂：高碘酸、无色品红、硫代硫酸钠、偏重亚硫酸钠、高锰酸钾等溶液，4°C冰箱内保存，则可延长使用时间。 但有些染液如染中性脂和酸性脂的硫酸耐尔蓝液如放入冰箱保存，则很容易破坏而失效。 而有些染液性能很稳定，室温可保存很长时间: 维多利亚蓝液室温下可保存使用3-4年 注意事项及个人见解： 1、染色时，应选用阳性切片作对照。 2、分化可选择盐酸酒精，分化后切片经水洗应为淡粉色。 3、复染可选择美篮，复染数秒后，在95%酒精内稍作脱色， 否则会遮盖抗酸杆菌，造成对比不清晰。 4、苯酚俗称石炭酸，为无色结晶。如呈红色，则是受到氧 化，不应使用，配制5%苯酚水溶液时，先将整瓶苯酚置 于60°C恒温箱中加热溶解，然后速取5ml加入95ml蒸馏 水充分混合。 5、染色后切片如果经苯酚二甲苯，则抗酸菌易脱色。 6、以往苯酚碱性品红染色时都是用酒精灯直接加热染色， 加热温度不易控制，染色结果也相对不稳定，切片上染 液沉渣较多，易与抗酸杆菌混淆，加热不当切片易炸裂 。可采用盛有染液的立式染缸染色，切片无污染，加热 温度均匀，染色结果清晰，也可在切片上滴加染液，放 入湿盒内，置于恒温箱中。染色时不能使切片干燥。 7、采用汽油松节油混合液代替二甲苯