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* * 色 谱 法（chromatography） 第一节 色谱技术的概念和特点 一、发展史： 二．基本概念： 色谱法：利用混合物中各组分的理化性质的差异（吸附力、溶解度、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、电荷等），使各组分在固定相和流动相中具有不通的分配系数，在通过一定的支持物（色谱柱或色谱板）时，在流动相的带动下，溶质在两相间做相对移动，并按分配系数的不同进行多次分配，从而使结构上具有微小差异的各组分得到分离的过程，称之为色谱法。 石油醚（流动相M） 植物叶子的石油醚萃取液 碳酸钙（固定相S） 玻璃管（色谱柱） 胡萝卜素、叶黄素 和叶绿素A、B 连续色带 （色谱） 三．特点： 1、高效能： 2、高度选择性 3、高灵敏度 4、操作简单 不足之处：定性较差 定量精确 第二节 色谱法的分类 气相分配色谱（气－液色谱） 气相色谱 气相吸附色谱（气－固色谱） 一般的吸附色谱（吸附剂） 吸附色谱 离子交换色谱（离子交换剂） 亲和色谱（配基） 柱色谱 液相色谱 分配色谱 纸色谱 薄层色谱 凝胶色谱（分子筛效应） ? 色谱 第三节 色谱的基本理论 一、色谱法中常用的术语 一 流出曲线和色谱图 二 色谱峰 三 基线 四 保留值 1．保留时间和保留体积 VR tR×Fc 2．死体积和死时间 VM tM×Fc 3. 调整保留体积和调整保留时间 V′R VR—VM tR′ tR— tM V′R t′R×Fc 五 峰高和峰面积 图2-1 保留值示意图 六 色谱峰区域宽度 1．标准差： σ是峰高0.607 倍处色谱峰宽度的一半。 2. 半峰宽： W1/2 3. 峰宽： Wb Wb 4σ Wb 1.699W1/2 W1/2 2.354σ 图2-2 峰宽表示方法示意图 七 分配系数与分配比 1．分配系数 distribution coefficient K 当某组分在固定相—流动相中分配达到平衡时，该物在这固/流二相中的浓度比即为分配系数，用K来表示：K值小,该物质在流动相溶解度大. K 2．分配比 Partition ratio k′ 分配比又称容量因子 ：当某物质在固/流二相中分配达到平衡时，该物质在固定相与流动相中的重量比。 K′ K′ ＝ ＝ K 故当该两相的体积确定不变时K∝K′ 二、塔板理论 n个理论塔板 n n 5.54 16 三、速率理论 H A ＋ B/u ＋ Cu 式式中u为流动相流速，A、B、C为与柱性能有关的常数 一 涡流扩散项A 涡流扩散引起谱带的展宽 A 2λdp 二 分子扩散项B/u B 2γDg 三 传质阻力项Cu 气—液色谱 : 气相传质阻力相： 气相→气液界面→液相过程 液相传质阻力相：液相→液气界面→气相过程 理论塔板高度与流动相流速的关系 A: 气相色谱 B: 液相色谱 影响色谱柱理论塔板高度（H）的两个主要因素 ： 1.流动相流速 2.固定相颗粒大小 小结： 1．塔板理论是由研究分配色谱时所得出的一半经验理论，但它是一切色谱法的理论基础。 2. 塔板理论是从热力学的观点来研究平衡过程，并由此提出了理论塔板数和理论塔板高度的概念，为我们提出了它们的计算公式和评价柱效能的指标。 3. 速率论则是从动力学的观点来看待色谱的过程，通过范第姆特方程给我们提出了影响理论塔板高度H的一些因素，如固定相颗粒的粒度、均匀性、柱填充的均匀性、固定相液层的厚度及流动相的流速等。在实际操作中如能很好地调节和控制这些因素，色谱柱将能充分发挥其分离效能，获得最佳的分离效果。 四、分离度 resolution ——色谱分离效能的总指标 Rs的定义为：两相邻组份色谱峰保留时间之差与两峰基线宽度总和之半的比值，它可在色谱图中用下式计算而得： Rs ＝ Rs 1 Rs 1.5 RS＜1 RS 0 第四节 常用的色谱方法 一、吸附色谱（adsorption chromatography） 吸附色谱是指样品混合物随流动相通过由吸附剂组成的固定相时，由于吸附剂对不同组分有不同的吸附力，从而不同组分随流动相移动的速度不同，最终可将混合物中不同组分分离。这种分离方法取决于待分离物质被吸附剂固定相所吸附的能力，以及它们在分离时所用的溶剂流动相中的溶解度这两个方面的差异。根据操作方式不同，吸附色谱可分柱色谱和薄层色谱两种。 （一）、柱色谱（Column chromatography） （二）、薄层色谱（thin layer chromatography） 样品与吸附剂：溶解、吸附、再溶解 不同物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附、解吸附、再吸附、再解吸附 二、分配色谱（partition chromatography） 分配色谱是利用