不同品种蝴蝶兰通过叶片原球茎途径再生体系的研究.docVIP

不同品种蝴蝶兰通过叶片原球茎途径再生体系的研究 　　摘要 以109、沙西米、火凤凰3个蝴蝶兰品种为材料，对蝴蝶兰叶片原球茎途径的再生体系进行了研究。结果表明，109叶片原球茎诱导的最佳培养基为处理1/3MS+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L，最佳壮苗培养基为1/2MS+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L、生根时NAA浓度为0.5 mg/L最佳。火凤凰叶片原球茎诱导的最佳培养基为处理1/3MS+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L、最佳壮苗培养基为1/2MS+肌醇0.1 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L、生根时NAA浓度为0.7 mg/L最佳。沙西米叶片原球茎诱导的最佳处理为花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L、最佳壮苗培养基为花宝1号3.0 g/L+牛肉胨2.0 g/L+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L、生根时NAA浓度为0.5 mg/L最佳。 　　关键词 蝴蝶兰；109；沙西米；火凤凰；叶片；原球茎；再生体系 　　中图分类号 S682.31；Q813.1+2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）15-0177-02 　　蝴蝶兰是单茎性气生兰，传统的繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢[1-2]。无菌播种和组织培养是其快速繁殖的重要手段[3-4]。20世纪60年代，国外开始利用组织培养技术繁殖兰花种苗。试管苗繁殖，在室内进行工业生产不受季节、气候的影响。采用组织培养法来繁殖蝴蝶兰，可以获得与母株完全相同的优良遗传特性[5]。通过此种方法产生的蝴蝶兰苗通常称为分生苗或组培苗。用于进行分生培养的植物组织（外植体）可以是顶芽（茎尖）、茎段（休眠芽），也可以是幼嫩的叶片[6]。 　　本研究以目前市场上比较流行的3个品种109、沙西米、火凤凰为例，探讨蝴蝶兰通过叶片丛生芽途径获得再生植株的方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　选用山东省聊城市农业科学研究院生物工程中心组培室内109、沙西米、火凤凰3个品种健康、无菌植株的叶片为试验材料。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 叶片原球茎的诱导。将从无菌植株上切下来的叶片直接接种于诱导培养基中，并进行暗处理。采用的基本培养基A为花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L，B为1/3MS+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L，pH值5.2～5.4，通过加入不同激素配比，找出3个品种各自最适合的原球茎诱导培养基。激素配比见表1。 　　1.2.2 增殖和分化培养基配方筛选。将诱导出的原球茎接种到增殖和分化培养基中。培养基和激素设计同原球茎诱导培养基。 　　1.2.3 壮苗培养基。将增殖获得的芽接种到壮苗培养基中进行壮苗培养。培养基如下：Z-A：1/3MS+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L；Z-C：1/2MS+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L；Z-D：花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+柠檬酸0.03 g/L+炭粉1.0 g/L+椰汁100 mL/L[7-8]。 　　1.2.4 生根培养基中激素筛选。经壮苗培养后的芽体接种到生根培养基中进行生根培养。基本培养基为1/2MS+香蕉匀浆100 mL/L+碳粉1 g/L+柠檬酸0.03 g/L。激素设计为NAA分别为0.3、0.5、0.7、0.9 mg/L 4个梯度[9]。 　　2 结果与分析 　　2.1 叶片原球茎的诱导 　　沙西米和火凤凰原球茎的诱导比较容易，而109较难。由表2可知，109、火凤凰叶片原球茎诱导的最佳培养基为处理B3（1/3MS+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L）；沙西米叶片原球茎诱导的最佳处理为A3（花宝1号3.0 g/L+肌醇0.1 g/L+椰汁100 mL/L+BA 5.0 mg/L+Ade 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L）。 　　2.2 原球茎的增殖和芽的分化培养基筛选 　　将2.1获得的原球茎在增殖和分化培养基中培养2个周期后，通过比较观察发现，3个品种各自在其最佳诱导培养基中的增殖和分化效果最佳。 　　2.3 壮苗培养基的筛选