元英进-科技支撑验收报告纤维素乙醇讲解.pptVIP

实验中发现，随着底物的酶解，部分纤维素酶回到溶液中，以自由酶形式存在。因此，我们设计了新鲜底物重吸附工艺，具体流程如图，即在酶解水解液中加入新鲜底物重吸附溶液中的自由酶，用于下一轮的水解。实验中添加了非离子表面活性剂吐温80，影响底物和酶的相互作用，降低木质素对酶的吸附，使更多酶游离于溶液中。利用该工艺可回收内切和外切纤维素酶，连续操作3次可使纤维素酶利用率提高一倍以上。该方法工艺和设备简单，适于工业化生产。对该工艺，我们进行了单因素实验和响应面优化，得出了底物浓度、加酶量、吐温80加入量等参数值，在最优条件下酶回收率可达85.7%。 * 设计并构建了以“微滤-超滤-纳滤”为主体的多级膜分离设备。这是30L多级膜分离装置图。 * 与国际进展比较，我们在最终底物浓度和酶解提高率上均较高。 * 这是发酵制醇部分研究的框架图，主要从发酵微生物和纤维素水解液发酵优化两个方面展开。其中微生物的研究主要围绕微生物的耐受性展开，包括抑制剂耐受性和乙醇的耐受性；水解液发酵的优化主要是优化发酵相关参数，并进行了全流程的物料衡算。 这是当前国际上主要的单一抑制剂耐受菌株和本项目的菌株的耐受情况列表。 乙醇作为发酵的终产物，对发酵微生物有非常大的毒害作用。提高乙醇耐受对于降低纤维素乙醇的生产成本有重要影响。这是当前国际上主要的乙醇耐受菌株和本项目得到的耐受菌株情况列表。 以1000g稻草秸秆为底物，经过氨爆破预处理，酶解和发酵，最终可得到175.6g乙醇。并发现：酶解过程中产生的寡糖（寡聚葡萄糖和寡聚 木糖）是纤维素乙醇 转化过程中的障碍之一。 以100g草料高粱为底物，经过氨爆破预处理，酶解和发酵，最终可得到17.1g乙醇，酶解（约18%的干物质载荷）过程的纤维素和半纤维素的转化率分别达到74.0%和72.8%，发酵过程的糖醇转化率达到90.0%。 以100g甜高粱渣为底物，经过水洗、氨爆破预处理、酶解和发酵，在不利用水洗液的情况下，最终可以得到11.0g乙醇，其中发酵过程的糖醇转化率为82.2%。 以100g甜高粱渣为底物，在利用水洗液的情况下，最终可以得到15.9g乙醇，其中发酵过程的糖醇转化率为96.9%。 * * * 0：现阶段我们所用的燃料，无论是航油还是汽油、柴油，均是由石油等化石原料炼制而成。因为其不可再生性，使得近两年燃料价格成倍上涨。 1：因此，从农林业废弃物等生物原料出发，构建能够能够同时利用五六碳糖，并具有燃料分子合成模块的工程化人工合成细胞的任务显得迫切而重要。 2：以航空燃料为例，2010年全球消耗总值为2150亿美元。按照国际航空运输协会预测的生物航油替代化石航油的比例，在2020年，生物航油即将产生一个每年具有300亿美元的市场，并且该市场还会逐年上涨。 * 本项目的四大研究内容中，功能底盘细胞的构建是模块表达和产品合成的基础，模块和基因组的合成为底盘和产品的表达提供工具，底盘细胞和模块的结合，最终形成产品的生产和应用。 * * * 菌株 耐受能力 所属单位 TMB3400-FT30-3 延滞期从90小时减少到17小时（含40%水解液的培养基） 隆德大学 S. cerevisiae 307-12-F40 耐受30mM（2.88g/L）糠醛 美国农业部 ATCC 211239 耐受30mM（2.88g/L）糠醛 美国农业部 Bakers 耐受50mM（5g/L）糠醛 隆德大学 突变株IV 含8g/L醋酸的培养基中生长 VTT公司 突变株I、V、VI 含6g/L醋酸的培养基中生长 VTT公司 SF 耐受10g/L糠醛 天津大学 SA 耐受35g/L醋酸 天津大学 SP 耐受8g/L苯酚 天津大学 3.1 单一抑制剂耐受 3.2 复合抑制剂耐受 复合抑制剂耐受菌株 菌株标号 耐受能力 归属单位 YYJ 003 糠醛1.3g/L，苯酚0.5g/L，乙酸5.3g/L 天津大学 M1 糠醛1.3g/L，苯酚0.5g/L，乙酸5.3g/L 天津大学 YYJ 003-1 糠醛1.3g/L，苯酚1.5g/L，乙酸5.3g/L 天津大学 M1-1 糠醛1.3g/L，苯酚1.5g/L，乙酸5.3g/L 天津大学 MA 糠醛1.3g/L，苯酚1.5g/L，乙酸5.3g/L 天津大学 MF 糠醛1.3g/L，苯酚1.5g/L，乙酸5.3g/L 天津大学 I6 糠醛1.3g/L，苯酚1.5g/L，乙酸5.3g/L 天津大学 TMB 3001 (adapted) 呋喃类2.2g/L，酚类1.4g/L，酸类5.0g/L 隆德大学 注：苯酚是酚类中毒性最大的化合物。 3.3 乙醇耐受 国际乙醇耐受菌株： 菌株 耐受能力 策略 所属单位 SC1 存活于含20%（V/V）乙醇培养基中 驯化 Victoria University，澳大利