研究生仪器分析课170p讲解.ppt

液相色谱及质谱联用技术 闫仲丽 2013.11 第一部分 液相色谱概述 色谱起源 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的 。 色谱定义 色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术 流动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相，色谱柱 色谱优点 同时分析 分离性能好 灵敏度高 (ppm-ppb) 进样量小 (1-100uL) 易回收 色谱分类 高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography (HPLC) 气相色谱 Gas Chromatography (GC) 薄层色谱 Thin-Layer Chromatography (TLC) 毛细管电泳 Capillary Electrophoresis(CE) HPLC 与 GC 液相色谱与毛细管电泳 驱动力： 泵 电场 柱的作用： 分离 通道 结构： 泵 电极 环保： 有机污染 绿色 离子色谱与液相色谱 离子色谱的输液泵系统与高效液相色谱的输液泵系统基本相同。 其工作过程为： 输液泵将淋洗液均匀地、无脉冲地送到分离系统，在色谱柱前通过进样系统将样品送入到色谱柱，各组分在色谱柱内依次分离，并随着淋洗液依次经过抑制器（非抑制器不需要）送至检测器被检测，并用软件或专门的数据处理机进行数据分析处理。 与普通的液相色谱最大的不同是，抑制系统的离子色谱，有一个专门提高灵敏度和检测限的抑制器。 离子色谱的应用 阴离子：F-、ClO2-、BrO3-、Cl-、NO2-、Br-、ClO3-、NO3-、PO43-、SO42- 阳离子：Li+、Na+ 、NH4+ 、K+ 、Mg2+ 、Ca2+ 离子色谱不仅可以分析无机离子，而且还可以分析有机离子； 采用柱后衍生紫外检测，可以分析重金属和过度元素； 采用安培检测器可以分析糖类及氨基酸和抗生素等。 第二部分 液相色谱的分类及其分离原理 HPLC分类 液-固色谱法 液-液色谱法 ——正相模式 (NP-LC) ——反相模式 (RP-LC) 反相离子对色谱 (IPC) 离子交换色谱 (IEC) 尺寸排阻色谱 (GPC / GFC) 1. 液-固色谱法 流动相为液体，固定相为吸附剂。它是根据物质的吸附作用不同来进行分离的。其作用机制是溶质分子和溶剂分子对吸附剂活性表面的竞争吸附。分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。 吸附剂有活性碳，氧化铝和硅胶，适用于分离分子量200~1000的组分 。 2. 液-液色谱法 流动相和固定相都是液体，从理论上讲流动相与固定相之间互不相溶。 分离原理：试样中各组分在固定相和流动相之间的相对溶解度存在差异，因而溶质在两相间进行分配。分离过程是一个分配平衡过程 。 为了避免固定液的流失，亲水性固定液常采用疏水性流动相，即固定相的极性大于流动相的极性，这种情况称为正相色谱法；反之，固定相的极性小于流动相的极性，这种情况称为反相色谱法。 反相模式 (RP) C18 (ODS) C8 (octyl) C4 (butyl) 苯基 TMS 氰基 相互作用力是什么? 疏水性 如果样品有 如果样品有 反相模式下流动相的选择 优化水相（缓冲液）和有机相的比例非常重要 甲醇，乙腈和 THF 是常用的有机溶剂 在有缓冲液的情况下, 缓冲液的浓度和pH值非 常重要 增加流动相极性 固定相极性变化对分离的影响 固定相极性变化对分离的影响 正相色谱 硅胶柱 : 常用 氰基柱 : 常用 氨基柱 : 分析糖 二醇基柱 : 分析蛋白质 相互作用力是什么? 氢键力 如果样品有 – -COOH : 羧基 – -NH 2 : 氨基 – -OH : 羟基 氢键力强. 如果样品没有任何官能团，象碳水化合物 如果样品有大的基团, 由于空间障碍 氢键力弱. 正相模式下流动相的选择 主要试剂 – 烷烃 (戊烷, 己烷, 庚烷, 辛烷) – 芳香烃 (苯, 甲苯, 二甲苯) – 二氯甲烷 – 氯仿 – 四氯化碳 辅助试剂 – 甲基-t-丁基醚 (MTBE), 乙醚, 四氢呋喃 (THF), 二氧杂环乙烷, 嘧啶, 乙酸乙酯, 乙腈, 丙酮, 异丙醇, 乙醇, 甲醇 为了调整保留时间，可以选择主要试剂然后再加入辅助试剂。 增加流动相极性 反相色谱与正相色谱的对比 从上表可看出，当极性为中等时