医学微生物学实验三讲解.ppt

《医学微生物学》实验三 1、固体培养基(平板)接种法 连续划线法 注意事项 物理消毒灭菌法 （physical disinfection sterilization） 利用物理因素作用于病原微生物，将之清除或杀灭。 药敏实验 方法 纸片扩散法 肉汤试管稀释法 纸片法原理 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 试验程序 4.培养 置37℃温箱， 倒置培养18h 5.结果观察 抑菌圈直径≥15mm 高度敏感 抑菌圈直径10-15mm 中度敏感 抑菌圈直径≤10mm 低度敏感 无抑菌圈 不敏感或耐药 作业 1.完成口腔及皮肤细菌采集接种。 2.画图:液体培养、半固体、固体培养基上细菌生长现象。 3.根据药敏结果，分析白葡菌与大肠杆菌的敏感消毒剂、药物。 * * 微生物学与免疫学教研室 1、细菌的人工培养（讲授） 2、细菌的培养方法： 固体培养基接种法（自做）； 半固体、液体培养基接种法（示教） 3、药敏实验示教 实验内容 第四节 细菌的人工培养 一、培养基（culture medium）： 是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖 使用的混合营养物制品。 常用培养基的种类 按营养组成和用途分 厌氧培养基 基础培养基 增菌培养基 选择培养基 鉴别培养基 二、细菌在培养基中的生长情况 据物理状态分 1、液体培养基： 均匀混浊、沉淀生长、表面生长（菌膜）； 多用于增菌 均匀混浊 对照 沉淀生长 2、固体培养基： 含1.5%琼脂 用于分离培养 菌落：单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见 的细菌集团。 纯培养：挑取一个菌落，移种到另一培养 基中，生长出来的细菌均为纯 种，称为纯培养。 菌落特征－大小、形状、颜色、气味、透明度、光滑或粗糙、湿润或干燥、隆起或扁平、边缘整齐与否、是否溶血等→有助于细菌鉴定 菌落（S型） 菌苔 菌落（R型） 光滑型(S型) 粗造型(R型) 粘液型(M型) 3、半固体培养基：含0.3%~0.5%琼脂 鞭毛菌—混浊生长（沿穿刺线呈云雾状/羽毛状） 无鞭毛菌—沿穿刺线呈线状生长 用于检测细菌的动力和保存菌种 斜面划线示意图 4、斜面培养基接种法 应用：短期保存菌种 三、人工培养细菌的用途 在医学中的应用 1.感染性疾病的病原学诊断：明确病因，指导用药 2.细菌学的研究：细菌遗传、变异、耐药性 3.生物制品的制备：疫苗、类毒素、抗毒素 在工农业生产中的应用 （抗生素、维生素、酶制剂等） 在基因工程中的应用（ 基因工程菌→乙肝疫苗） 进入实验内容讲授 分区划线法 连续划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 灭菌接种环，取菌准备 分区划线法 原划线 标本：混合菌液 分组：1人一个固体平板 菌落示意图 细菌在固体培养基中的生长现象 1、无菌操作2、密而不重叠3、勿划破琼脂4、做好标记，第二天观察结果 消毒 (disinfection) 灭菌 (sterilization) 是指用物理方法清除物体表面的污垢、尘埃 和有机物 其目的是去除和减少微生物，并非杀灭微生物 是指用物理或化学方法清除或杀灭除芽孢以外的所有病原微生物 使其达到无害程度的过程 是指用物理或化学方法去除或杀灭全部微生物的过程包括致病微生物和非致病微生物，包括细菌芽孢和真菌孢子 清洁 (cleaning) 物 理 消 毒 灭 菌 法 日光曝晒 紫外线 臭氧 巴氏消毒法 煮沸消毒法 压力蒸汽灭菌法 燃烧法 干烤法 干热 湿热 热力 光照 辐射 微波 机械