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实验六 微生物的选育及其鉴定、分类、命名 —产蛋白酶M的筛选及初步鉴定（Gram染色） 一、实验目的 （1）稀释平板法获得菌落纯的微生物原理土壤是微生物的“大本营”，试剂和仪器设备 肉膏蛋白胨琼脂培养基，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，无菌移液管、称量纸、土样 四、实验步骤 1.倒平板 将牛奶培养基灭菌后，混合均匀倒平板，置水平桌面冷却。 选择性培养基：琼脂Met煮沸，待降温至温和后（过热会是蛋白热凝固变性），再加入牛奶混合，一边倒一边轻摇，注意无菌操作。 倒平板：一个三角瓶（180+10ml）可以倒10块（15~20ml）左右，多倒多练 注意：铁盒横放拿平皿，手托三角瓶底部，三角瓶瓶塞可以放桌面，盖上前过火，平推 2.制备土壤稀释液 称取土样1g，放入盛有90ml无菌水带有玻璃珠的三角瓶中，摇振约5分钟混匀并制成不同稀释度的土壤溶液。 3.涂布 用无菌吸管分别吸取土壤稀释液0.1ml于平板，并作上标记，用无菌玻璃涂棒，在培养基表面轻轻涂布均匀，室温静置10min待土壤溶液吸附进培养基。 选择10-6~10-9的稀释液涂布，平板多可以多做几个重复 4.培养 将培养皿倒置培养，于37℃培养24-48 h，对于产生透明圈的菌落,即为需要菌株，重复分离过程，直至获得纯培养。 五、实验结果与讨论 记录菌体和菌落群体形态特征，记录革兰氏染色结果。 六、思考题 筛选获得高产蛋白酶菌株的设计方案？