万寿菊的组织培养讲解.pptVIP

万寿菊的组织培养 目录 万寿菊的生活习性 组织培养的实验原理 实验方法与步骤 实验中可能产生的问题及解决步骤 万寿菊的生活习性 万寿菊原产墨西哥。喜温暖、湿润和阳光充足环境。万寿菊生长适温15～20℃，冬季温度不低于5℃。夏季高温30℃以上，植株徒长，茎叶松散，开花少。10℃以下，能生长但速度减慢，生长周期拉长。 万寿菊喜湿又耐干旱，特别夏季水分过多，茎叶生长旺盛，影响株形和开花。 万寿菊为喜光性植物，充足阳光对万寿菊生长十分有利，植株矮壮，花色艳丽。 组织培养的实验原理 植物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因。 实验方法与步骤 1.材料 实验材料：万寿菊（选取无伤口或者病虫的健壮植株） 2.实验步骤 （一）初代培养 制备培养基：MS+BA 1.2mg/L+NAA 0.3mg/L+蔗糖 3%+0.7%琼脂。 外植体的选择、剪切、清洗： 选择：未开花的菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 剪切：前去顶端和基部并去叶，再剪成约2cm长带有侧芽的茎段。 清洗：菊花茎段用清水清洗后可加入少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。 外植体灭菌：在无菌条件下，外植体用75% 酒精浸泡10s，再用0.1％升汞溶液浸泡10min，最后用无菌水冲洗4～6次。 外植体接种与培养：在无菌条件下，将万寿菊茎段进行切割，接种到培养基上，置于培养室进行光照培养2~3周。 继代增殖培养：在无菌条件下，将丛生芽切割成几块，分别接种于继代培养基上，每瓶2~3个芽，一般为30天。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为1-1.5cm时，就可以进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养。 生根培养：当愈伤组织长到一定大小后，更换生根培养基，进行生根培养，一个月后统计记录生根苗数。 试管苗的移栽：将已生根的试管苗在室温条件下开瓶并练苗2～3天，取出试管苗，用清水洗净根部粘附的琼脂，种植到消过毒的珍珠岩基质中生活一段时间。 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水，施肥，直至开花。 实验中可能产生的问题及解决方法 实验中可能会产生以下问题： 组织或器官的污染 组织或器官的褐变现象 组织和器官的玻璃化现象（主要现象） 组织或器官的污染 选取生长状况良好并且远离污染的植株。 培养器皿及操作工具进行严格的消毒和灭菌处理。 操作过程严格按照实验的程序来，并时刻做好消毒工作，保证减少细菌污染． 组织或器官的褐变现象 影响褐变的因素很多，植物的种类褐基因型、外植体的来源和生理状况以及培养基的成分都会不同程度的影响褐变的程度。一般木本植物的外植体比较容易产生褐变现象，在成年树尤其严重。培养基中含酚过高会导致褐变，含过高浓度的无机盐和肌醇也会加剧外植体的褐变。6-苄氨基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）也有诱导褐化的作用。强光和高温同样会促进褐化现象。 在培养基中加入抗氧化剂是防止褐变的有效措施。常用的抗氧化剂有抗坏血酸（VC）、柠檬酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇和聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等。可用抗氧化剂溶液预先处理外植体，或者在抗氧化剂溶液中切割和剥离外植体。必要时还可以将几种抗氧化剂结合使用。也可以将抗氧化剂加入到培养基中。另一种方法是在培养基中加入0.5～1％的活性炭，吸附对生长有抑制作用的褐色醌类物质。应当注意的是：活性炭也能吸附培养基中的激素类物质，影响茎尖的分化和生长，因此在使用活性炭的场合，需要适当提高培养基中激素的浓度。还有一种办法是不断地（每隔1～2d）将培养物转移到新鲜的培养基上，以摆脱老培养基中褐色物质的不利影响。在使用液体培养基的情况下，这种方法相当有效。 组织和器官的玻璃化现象（主要现象） 激素的种类、浓度及培养基的含水量与瓶内湿度对玻璃化苗的产生有着重要的影响。因此在培养基中适当增加琼脂用量，利用其固定和敛收水分的作用，使培养瓶中水分状况有一定程度的改善，在实验中，培养基琼脂浓度为0.7％，使用透气性封口膜，分装培养基经过15～20min冷却后封口，可降低培养基含水量及瓶内湿度，从而达到降低玻璃化苗产生的目的。 谢谢！