新型靛红衍生化β环糊精键合SBA 15液相色谱固定相的制备与表征.docVIP

新型靛红衍生化β环糊精键合SBA 15液相色谱固定相的制备与表征 　　摘 要 利用靛红的羰基与β环糊精单取代乙二胺的缩合反应，合成得到一种靛红衍生化β环糊精Schiff碱类化合物。以3 异氰酸丙基三乙氧基硅烷为偶联剂，将其键合到自制的有序介孔二氧化硅材料SBA 15表面，制得一种新型的靛红衍生化β环糊精键合SBA 15液相色谱固定相（ISCDP）。分别对β环糊精衍生物、SBA 15及固定相进行必要的结构表征。在反相色谱条件下，以卤代尿嘧啶类极性化合物和二取代苯位置异构体为探针，评价新固定相的基本色谱性能。在极性有机溶剂和反相模式下，将新固定相分别用于β受体阻滞剂药物和丹磺酰化氨基酸对映体的拆分，探讨了相关色谱分离机理。实验表明，靛红吲哚环的引入，增强了环糊精类固定相对卤代尿嘧啶的反相色谱分离能力，分析时间小于7 min。固定相分离硝基苯胺、氨基苯酚和苯二酚的位置异构体时也表现出较高的立体选择性，其中对位异构体均最后被洗脱，这与包结作用相关；靛红衍生化β环糊精配体也提高了固定相的手性分离能力，除疏水作用外，靛红衍生化β环糊精配体还能提供偶极、氢键、π π和包结等作用，多种协同作用力有利于提高新固定相的手性和非手性分离的选择性。SBA 15作为键合基质，其有序的孔结构有利于保持色谱柱的良好渗透性和小的传质阻力，在快速高效分离分析中具有应用潜能。 　　关键词 高效液相色谱法；靛红衍生化β环糊精键合相；SBA 15；手性和非手性分离机理 　　1 引 言 　　β受体阻滞剂是一类用于治疗高血压和心绞痛的手性药物，其对映体的药理、药代动力学和毒理等差异较大。通常，S 构型药物比R构型临床疗效高（约100倍），部分对映体存在拮抗和毒性[1]。因此，建立准确、高效、快速的手性分离方法，对食品安全、有效的药物质量监控和对映体药代动力学研究都具有重要意义[2]。 　　高效液相色谱（HPLC）由于选择性好、分离效率高、色谱条件温和、样品兼容性好，仪器日趋成熟等特点，已发展成为手性药物对映体拆分和含量测定的首选方法之一[3，4]。由于对映体的性质极其相似，发展选择性高和柱性能优越的固定相是手性药物分离与研究中的重要课题之一。β受体阻滞剂的对映体拆分涉及到常见的手性固定相（CSPs），如刷型、大环抗生素类、合成或半合成聚合物类、蛋白质类和分子印迹类等[5～11]，以纤维素类和大环抗生素类商品手性柱的报道居多，手性分离时间一般需要20～50 min。 2012年，Morante Zarcero等[9]比较了4根纤维素和大环抗生素商品柱 （Chiralpak AD H， Lux Cellulose 1， Chirobiotic T， Sumichiral OA 4900） 在极性有机和正相色谱模式下对普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔和吲哚洛尔的手性拆分能力，研究表明， Chirobiotic T是唯一能完全拆分4种洛尔对映体的色谱柱。丁国生等[10]制备了去甲万古霉素固定相，在极性模式下成功拆分了普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔和烯丙洛尔。李芳等[11]采用直链淀粉商品柱ChiralPak AD H拆分了比索洛尔对映体，考察了流动相的组成、流速及柱温对分离的影响。 叶金星等[12]采用新型的全苯基化环糊精商品手性柱（Shiseido CD Ph），以乙腈 0.5 mol/L NaClO4（60∶40，V/V， pH 4.0）为流动相，拆分了3种常见的洛尔类手性药物对映体。 　　环糊精（Cyclodextrins，CD）是由D吡喃葡萄糖单元通过α 1，4 糖苷键连接而成的环状分子，含多个手性碳原子，具有疏水性的空腔和腔外亲水性的羟基结构，在手性分离方面极具应用潜力。Armstrong等[13，14]用环氧基偶联剂与βCD开环反应，首次制备了醚键连接的稳定的βCD键合手性固定相，之后分别经异氰酸酯基和酰基改性，这类固定相能为溶质提供多种作用位点，与被分析物之间存在氢键、π π、 偶极 偶极、离子对和包结等相互作用，有利于在正相、反相和极性有机模式下拆分更广泛的手性药物[15]。靛红（Isatin）是中草药青黛中的有效成分之一，具有抗衰老、降血脂、神经元保护和杀菌消炎等多种药理作用[16]。其分子结构中的吲哚醌具有较大的平面共轭π电子体系和极性的羰基、胺基，本研究合成了靛红单取代衍生化βCD手性选择配体，期望改善环糊精端口的疏水性，有利于溶质进入腔体被包结，并提高反相色谱性能，通过增加多种协同作用位点来提高手性和非手性分离的选择性及分离范围，实现一柱多能。色谱传质过程应该是一种有序的运动，除配体的选择外，固定相键合基质也在建立快速手性分离方法中扮演着重要的角色。介孔材料由于具有较大的比表面积、孔径均一可调、形貌可控、表面易修饰和传质阻力小等优点[17]