平酸菌及其检验.docVIP

平酸菌及其检验 一、平酸菌简介 45－60℃，最适生长温度为50－55℃，在37℃生长缓慢，多数菌种在pH6.8-7.2生长良好，少数菌种能在pH5.0生长，广泛分布于土壤，灰尘和各种变质食品中。造成罐头食品平盖酸败的细菌，从微生物学分类来分，主要有二种：通常是嗜热脂肪芽胞杆菌，凝结芽胞杆菌。 　　嗜热脂肪牙胞杆菌：（Bacillus stearothermo philus 革兰氏阳性菌，能运动，周生鞭毛。芽胞椭圆形，亚端生或端生，通常使孢囊膨大，最高生长温度65－75℃。能够葡萄糖产酸，水解淀粉。 　　凝结芽胞杆菌：（Bacillus Coagulans 革兰氏阳性，能运动，周生鞭毛。芽胞椰圆形或柱状，一次端生或端生，偶尔中生，有些菌株孢囊膨大不明显，有些菌株的孢囊大。最高生长温度55－60℃，最低生长温度15－25℃。接触酶阳性，葡萄糖产酸。 二、罐头食品中平酸菌的检验方法 　　1．试样制备： 　　罐头样品预先经55℃保温一周，然后按正常方法进行开罐，吸取内容物液体1毫升，如为固体内容物则取1克，以无菌手续接种于3＃培养基中，每罐接种2支。 　　2．增菌培养 　　接种试样的3＃培养基试管，于55℃培养48小时，如发现指示剂由紫变黄即判断为阳性，同时进行涂片镜检为芽胞杆菌（有时不易检到芽胞），如阳性需继续培养48小时。 　　3 　　将阳性培养基试管划线接种于3＃培养基琼脂平板55℃培养48小时，检查有无可疑菌落（菌落黄色，周围有黄色环，中心色深不透明），如有可疑菌落则接种于普通琼脂斜面和芽胞培养基斜面，55℃培养24小时，涂片镜检观察有无芽胞，以及芽胞的形状及位置，并同时以普通琼脂斜面培养物进行生化学试验。 　　4 　　菌体形态：为革兰氏阳性芽胞杆菌。 　　生化反应：取上项斜面培养物按下列项目进行鉴别。 　　平酸菌生化反应鉴别表 项目菌别 60℃培养 硝酸盐 葡萄 糖 靛基质 V－P 反应 7％NaCL 肉汤 柠檬 酸盐 酸性胰胨 嗜热脂肪 芽胞杆菌 生长 d + + － － － － 不生长 凝结芽胞 杆菌 不定 d- － － + － b 生长 注：＋为产酸或阳性，-为阴性d＋：50－85％的阳性d－：15－－49％的阳性b：25－49％阳性 45－55℃培养三天后无反应报告为阴性。 5．培养基的配方 　　①3＃葡萄糖肉汤培养：　　 蛋白胨 5克 葡萄糖 5克　　 酵母浸膏 1克 牛肉膏 5克　　 可溶性淀粉 1克 黄豆浸出液 50mL　　 水1000mL 0.4%溴甲酚紫 4mL　　 pH 7.0-7.2　　 115℃高压灭菌15min 　　②3＃培养基琼脂： 　　3＃葡萄糖肉汤 1000mL　　琼脂 18－20克　　pH 7.2－7.4　　 121℃高压灭菌15min 　　③酸性胰胨琼脂 　　胰蛋白胨 5克 酵母膏 5克　　葡萄糖 5克 K2HPO4 4克　　水1000mL 琼脂 18－22克（15－20g 　　琼脂粉 12克　　pH5.0 　121℃高压灭菌15　min 　　④7%NaCL肉汤 　　蛋白胨 5克 牛肉膏 3克　　NaCL 70克 水 1000mL　　pH7.0 121℃高压灭菌15min 　　⑤芽胞培养基 　　牛肉膏 10克 蛋白胨 10克　　NaCL 5克 K2HPO4 3克　　 K2HPO4 3H2O 3.9克）　　MnSO4 0.03克 琼脂 25克　　pH 7.2 121℃高压灭菌15min 　　⑥V－P培养基 　　蛋白胨 5克 葡萄糖 5克　　K2HPO4 5克 蒸馏水 1000mL　　pH7.2 121℃高压灭菌15min 　　⑦西蒙氏枸橼酸盐琼脂（柠檬酸盐） 　　NaCL 5克 硫酸镁 0.2克　　磷酸铵 NH4H2PO4）1克 磷酸氢二钾K2HPO4）1克　　枸橼酸钠 5克　　琼脂 20克 蒸馏水 1000mL　　0.2％溴麝香草酚兰酒精溶液 40mL　　pH 6.8 121℃高压灭菌15min 　　⑧童汉氏蛋白胨水 　　蛋白胨 10克 NaCL 5克　　蒸馏水 1000mL pH 7.4　　121℃高压灭菌15min 　　⑨硝酸盐肉汤 　　牛肉膏 3克 蛋白胨 5克　　硝酸钾 1克 蒸馏水 1000mL　　pH 7.0 121℃高压灭菌20min 15min