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总胆红素重氮法检测操作规程 产品注册号：国食药监械（准）字2004第座机电话号码号 产品执行标准：YZB/国2221-2003 原理： 总胆红素在二甲亚砜等加速剂作用下，在酸性溶液中与重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮胆红素，与经过同样处理的校准液比较，即可计算出样品中总胆红素的含量。 样品准备： 样品为新鲜空腹无溶血的血清或血浆。样品应在低温条件下运输保存，样品中总胆红素2-8℃密闭避光保存可稳定3天，冰冻保存可稳定3个月。 测定步骤： 1.基本参数： 方法：终点法 波长：560nm 反应温度：37℃ 光径：10mm 反应时间：5min 2.操作： 根据测定所需试剂量，取R1和R2按50：1比例混合，即为工作液。根据以上参数按下表操作： 测定 （U） 测定对照 UB 校准 （C） 校准对照 （CB） 样品（ul） 校准液（ul） 工作液（ul） R1 （ul） 100 __ 1500 __ 100 __ __ 1500 — 100 1500 __ — 100 __ 1500 混匀，37℃恒温5分钟，560nm波长，以工作液调零，测定各管吸光度值。 计算： 1. 因素法：用本试剂盒操作，测得偶氮胆红素参考摩尔吸光系数为74290（波长 560nm，光径 10mm，样品/试剂 1/15），其相应的F值为215.经严格检定标化的仪器，可按以下公式计算结果： 样品Tbil含量（umol/L） Au-AuB ×215 例：Au 0.080 AuB 0.040 则 样品Tbil含量（umol/L）bil含量（umol/L）bil含量（umol/L）bil含量超过342.0umol/L，则用蒸馏水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。 本试剂盒不适用于肝素抗凝血浆。 校准用胆红素纯品及参考血清均应注意避光，建议分装后冰冻保存，不可反复冻融。 试剂与样品用量可根据需要按比例改变。 试剂适用后立即盖紧瓶盖，避免污染。 警示及提示性说明： 试剂变混浊或空白吸光度值＞0.150，将不能使用，应弃去。 试剂反应后所产生的废液及使用后难降解的包装材料应集中收集后交当地环境废物处理站处理。 贮存条件及稳定性： 试剂2～8℃密闭避光贮存可稳定12个月。 工作液2～8℃密闭避光贮存可稳定5天。 参考值范围： 5.1～17.1umol/L 建议各实验室建立自己的参考值范围。 参考文献： 韩志钧等.临床化学常用项目自动化分析法.辽宁科技出版社，1991年第一版 催云龙.介绍一种胆红素测定方法.临床检验杂志，1985，5（1）：20 倪星忠等.血清总胆红素测定中加速剂的作用机制探讨.临床检验杂志，1984，2（3）：1