02微生物实验菌种管理规程(3.11审核) 2.docVIP

取 代 文件发放号 涉及部门： 质监科  1、目 的：规范微生物试验用菌种的管理，确保菌种的有效使用。 2、适用范围：微生物试验用菌种的管理。 3、责 任 者：质检科负责人、微生物试验人员、菌种管理人员 4、正 文： 4.1概念 a、标准菌株：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。 b、标准储备菌株：由标准菌株经一次传代得到的培养物。 c、商业派生菌株：由供应商提供的所有特性与标准菌株等效的菌株。 d、工作菌株：由标准储备菌株经传代得到的培养物。 e、代：将活的微生物接种到新鲜培养基中进行培养，并希望获取新的微生物培养物。这种操作方式，新培养物对接种培养物而言就称为一代。 4.2菌种的采购和接收 4.2.1菌种的采购 4.2.1.1从药检所或菌种保藏中心等外单位购入菌种斜面或冻干菌种。 4.2.1.2根据工作需要对购买国内保藏中心提供的菌种斜面提前1个月填写采购申请单，冻干菌种提前2个月申请购买，国外保藏中心提供的菌种应提前3个月申请购买。 4.2.2菌种的接收 4.2.2.1检定菌应设专人保管，管理人员应接受过专业培训，有足够的菌种保存经验。 4.2.2.2接收菌种时，应核实菌种的名称、编号、传代代数、数量、有效期等，并调查清楚菌种的保存条件和注意事项。 接收时应填写菌种接收登记表。内容包括：菌种名称、菌种保藏中心编号、传代次数、接收日期、菌种来源等。 4.2.3对新购入的冻干菌种在使用前应按要求对其进行生物形态确证试验和纯度鉴定，由于新购买的菌种斜面已由菌种提供单位做过生物形态确证试验和纯度鉴定，所以传代5代以内的菌种斜面不需要进行纯度鉴定。 4.2.4对新购入的斜面菌种应在2～8℃保存，并应在1周内转接。 4.3菌种的复苏 4.3.1使用人员根据需要应向菌种管理人员领取菌种，仔细核对标签上菌名、编号，并在《菌种接收及领用登记表》上记录菌名、数量、领用人、领用日期等信息。 4.3.2菌株解冻后不得重新冷冻和再次使用。 4.3.3菌种复苏应在生物安全柜内操作。 4.3.4常用菌种接种用培养基和培养条件表 菌种名称 接种用培养基 培养条件 大肠埃希菌Escherichia coli 营养肉汤或营养琼脂培养基 30-35培养18-24小时 金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus 营养肉汤或营养琼脂培养基 30-35℃培养18-24小时 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 营养肉汤或营养琼脂培养基 30-35℃培养18-24小时 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 营养肉汤或营养琼脂培养基 30-35℃培养18-24小时 短小芽孢杆菌Bacillus pumilus 营养肉汤或营养琼脂培养基 30-35℃培养18-24小时 藤黄微球菌Micrococcus luteus 营养肉汤或营养琼脂培养基 30-35℃培养18-24小时 沙门菌Salmonella 营养肉汤或营养琼脂培养基 30-35℃培养18-24小时 生孢梭菌Clostridium sporogenes 硫乙醇酸盐流体培养基 30-35℃培养18-24小时 白色念珠菌Candida albicans 改良马丁培养基或改良马丁琼脂 23-28℃培养24-48小时 黑曲霉 Aspergillus niger 改良马丁琼脂培养基 23-28℃培养（5-7天） 4.4菌种的传代 4.4.1每株菌种应建立菌种使用及传代记录，斜面菌种应根据其特性决定传代时间间隔。 各类斜面菌种保藏温度与传代间隔时间表 菌种 保藏温度 传代间隔时间 细菌 2～8℃ 每一个月移植一次 放线菌 2～8℃ 每2-4个月 移植一次 酵母菌 2～8℃ 每2个月移植一次 芽孢杆菌 2～8℃ 每3个月移植一次 霉菌 2～8℃ 每3个月移植一次 4.4.2传代时使用须核对名称、编号，传代代数及日期，所用培养基传代和接种规程 4.4.2.1控制传代次数，传代次数越多，突变的几率越大，因此要尽量少传代；根据菌种特性和实际保存情况，最多传代不超过5代，超过此次数，应加热灭活，菌种有异常情况或有杂菌生长，则应随时更代。 4.4.2.2菌种的传代应在生物安全柜中进行。 4.4.2.3在规定的保存期内,取 5代以内的菌种管（琼脂培养基斜面培养物） ，取其中1支重复接种斜面培养基，制备下一代工作菌种用于传代。 4.4.3传代和接种规程 4.4.3.1 先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作，烧灼接种环。 4.4.3.2 再将原有的菌种斜面培养基（简称菌种管）与待接种的新鲜斜面培养基（简称接种管），持在左手拇指、食指及中指之间，要注意能清楚地观察到斜面，菌种管在