心包积液―肝坏死综合征高免卵黄抗体的研制.docVIP

心包积液―肝坏死综合征高免卵黄抗体的研制 　　摘要：采取心包积液-肝坏死综合征病鸡的肝脏匀浆冻融，接种SPF鸡胚，制备尿囊液灭活水苗，用两种免疫程序对产蛋鸡进行免疫，用琼脂扩散试验检测其卵黄抗体水平，制备高免卵黄抗体。经中和试验和临床试验，结果显示高免卵黄抗体对该病的预防和治疗效果明显。 　　关键词：心包积液-肝坏死综合征；组织灭活水苗；卵黄抗体；回归试验；中和试验 　　中图分类号：S855.3；S858.31 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）08-2053-02 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.08.033 　　Abstract： In this study， the liver homogenate from the sick chicken with pericardial effusion-hepatic necrosis syndrome was inoculated to SPF chicken embryo to prepare allantoic fluid inactivated vaccine after three times freezing and thawing. Two procedures were employed to immune the hens. Then， agar gel precipitation（AGP） was used to test the antibody level in yolk and prepared the yolk antibody. The neutralization test and clinical test identified that yolk antibody showed an obvious effect on preventing and curing for the disease. 　　Key words： pericardial effusion-hepatic necrosis syndrome. inactivated vaccine； yolk antibody； animal test； neutralization test 　　心包积液-肝坏死综合征是由I群禽腺病毒引起[1]，近阶段该病在河南、山东、河北、安徽、山西等省大面积流行，死亡率在10%～30%，严重时可达80%，且该病的发生呈上升趋势，已成为危害蛋鸡、肉鸡生产的主要传染病[2-6]。该病发病急、病程短，且无特效治疗药物，国内无特异性疫苗。为此，研制抗心包积液-肝坏死综合征卵黄抗体对发病鸡群进行治疗成为主要控制途径。对研制的心包积液-肝坏死综合征卵黄抗体的安全性、效价及治疗效果进行了研究，旨在为其临床应用提供理论依据和参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　试验动物：150日龄海兰褐蛋鸡300只（河南牧业经济学院试验鸡场提供）；SPF种蛋和SPF30日龄雏鸡由中外合资山东济南帕斯家禽有限公司提供；鸡心包积液-肝坏死综合征灭活苗和阳性血清，由河南牧业经济学院动物保健实验室制备。 　　1.2 方法 　　1.2.1 鸡心包积液-肝坏死综合征灭活水苗制备 　　取典型病例的肝脏组织，用生理盐水以1∶10（m/V）制成组织匀浆液，反复冻融3次，3 000 r/min离心20 min，取上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，取0.1 mL滤液尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚，在37.8 ℃孵化箱内继续孵化，15日龄收取尿囊液，用1%甲醛灭活48 h，制成灭活水苗。 　　1.2.2 阳性血清的制备 取1.2.1制备的灭活水苗注射30日龄SPF雏鸡，每只0.5 mL，颈部皮下注射，间隔10 d后再次免疫注射1 mL/只，2周后采血分离血清。 　　1.2.3 动物回归试验 取接种过心包积液-肝坏死综合征病料的SPF鸡胚尿囊液，接种10只30日龄SPF雏鸡，颈部皮下注射0.2 mL/只，对照组10只注射生理盐水0.2 mL/只，分别饲养在负压隔离笼内，观察一周。 　　1.2.4 高免试验 试验分为3组，每组100只150日龄产蛋母鸡，分别为试验1组、试验2组和对照组，在同一饲养环境和饲养标准下饲养。试验前用鸡沙门氏支原体全血平板凝集试验淘汰阳性鸡。试验1组为第一天注射灭活水苗1 mL/只，首免7 d后再注射2 mL/只；试验2组第一天注射生理盐水1 mL/只，首免7 d后再注射灭活水苗1 mL/只。对照组注射等量生理盐水。二免后5 、10、15、20 d，每组选5只鸡进行翅静脉采血，用琼脂扩散试验测定其血清中抗体效价。 　　1.2.5 中和试验 选取30日龄SP