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植物RNA病毒检测技术研究进展 　　摘要 RNA植物病毒常用的检测方法有生物学检测法、电子显微镜技术、血清学方法和分子生物学方法等，对这些方法的应用及其特点的研究进展进行了相应的总结，以期能够更好地运用这些方法，进行植物RNA病毒的检测与研究。 　　关键词 植物RNA病毒；检测技术；研究进展 　　中图分类号 S432.41 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）09-0150-03 　　Abstract Commonly detection methods of plant virus including biological assay，electronic microscopy，serological methods and molecular biology method. In this paper，the research progress of using and characteristics of these methods were summarized，in order to make better use of these methods，to detect and study plant RNA virus. 　　Key words plant RNA virus；detection technology；research progress 　　几乎所有植物，包括粮食作物、蔬菜、果树、经济作物、花卉和一些经济林木都在不同程度上受到病毒的侵染，而其中90%的植物病毒为RNA病毒。以前人们太重视病毒所带来的影响，除非造成大面积的流行或毁灭性的损失。病毒所造成的损失不仅是产量上，同时也伴随着质量的降低，无论是果实、叶片，还是工业所用材料的有效成分、花卉的商品价值等都受到严重的影响，降低其使用价值。因此，快速、灵敏、高效的检测病毒的方法成为认识和研究植物病毒病的重要手段。目前，植物RNA病毒的检测方法生物学检测方法、血清学检测法、分子生物学检测法等，这些方法各有优点，为现代常用的植物病毒病检测方法。现将这些方法的特点介绍如下。 　　1 生物学检测法 　　又叫指示植物检测法。1925年，James Johnson开始使用特殊的植物鉴定植物病毒[1]，植物RNA病毒一般都会有特别的鉴别寄主或者特定的指示植物。指示植物就是指能对某一种或某几种病毒及类病毒产生特异反应，被感染后能很快的表现出特异症状的植物[2]。因为指示植物的不同，可以细分为草本植物检测与木本植物检测。草本植物检测的植物如藜科、豆科、茄科以及葫芦科等植物都具有明显的指示作用，通常采用摩擦接种的方法进行检测，在严格的防虫隔离情况下进行摩擦接种，从而获得可靠的检测结果[3]。李春敏等利用黄瓜、南瓜等指示植物，对PDV、PNRSV在指示植物上的表现症状进行了检测与研究，检测出PDV。生物学检测法操作简单，准确程度较高，应用颇为普遍[4]。然而其特异性不太明显，存在一种病毒侵染后出现多种症状或多种不同病毒侵染后只出现一种表现症状的的现象。植物检测法检测速度缓慢，灵敏度较差，侵染指示植物后大多需要1～2周才有表现症状，个别甚至需要1～3年，而且受到植物生长与季节的限制，寄主的选择要求严格，维护植物的费用很高，特别的指示植物较难以得到。 　　2 电子显微镜检测法 　　从20世纪40年代建立了电子显微镜技术，Kausche和Melcher首次在电镜下看到TMV以来，电子显微镜技术已成为一种重要的植物RNA病毒鉴定和常规检测手段。将感染病毒的植物组织制成电子显微镜检查样本通过电磁波源，利用电磁波的电子流，在电子显微镜下显示病毒的形态、大小、内含体以及染病组织超微结构等，从而诊断出病毒的种类。1959年电镜负染技术首次应用于病毒结构的研究，Brenner和Horne通过一些重金属离子能在蛋白体四周沉淀，在电镜下形成一个黑暗的背景，而蛋白体内部没有金属离子的沉积而形成一个清晰的亮区，使成型的图像呈底片样貌，因此称为负染色技术[5]。通过不断的发展和完善，电子显微镜检测技术被广泛应用并与其他技术相结合产生了新的方法，免疫电镜技术就是其中的一种，目前免疫电镜技术已应用于病害诊断、病原鉴定、机理研究等多项领域[6]。 　　电子显微镜检测技术是一种能够快速、灵敏而简便地检测出植物RNA病毒的方法，能够通过观察到病毒的结构、大小、形态、有无包膜等确定其种类。然而使用电子显微镜检测，专业要求较高，对典型病毒的特点和不同病毒组的形态必须有所了解，而且检测过程中易受到寄主内含物的影响而干扰结果。观测样本制作要求较高，操作技术复杂，对仪器设备有较高要求。 　　3 血清学检测法 　　血清学检测方法是利用抗原与抗体结合而产生的免疫学反应来进行