橡皮树组织培养研究.docVIP

橡皮树组织培养研究 　　摘要：以橡皮树“黑金刚”茎尖为试材，研究了不同激素水平对橡皮树愈伤组织诱导、丛生芽诱导、增殖和生根的影响，并对橡皮树试管苗的温室移栽技术进行了总结。 　　关键词：橡皮树；组织培养；试管苗；移栽技术 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　材料采自乌鲁木齐市燕儿窝风景管理站温室，挑选健壮、无病害的橡皮树母株，取其嫩枝顶芽和茎段为材料。 　　1.2试验方法 　　表面消毒：从橡皮树植株上剪取茎段，剪掉叶片，先用自来水冲洗10min，再用洗洁剂溶液洗涤1～2次。在无菌条件下，用75%的酒精浸泡50s，再用0.95%的次升汞溶液消毒18min，剪去材料的创伤面，留取0.5～1.00n长接种于培养基上。 　　1.3培养基 　　以MS为基本培养基，附加3%蔗糖及0.6%琼脂，灭菌前pH值调至5.8，按不同的培养目标添加相应的激素，配制成诱导分化、继代增殖、生根成苗培养基，常规方法灭菌。 　　1.4培养条件 　　培养温度为（25±3）℃，光照度为2000～2500Lx，每天光照12h。观察记录愈伤组织或芽的诱导增殖情况。将丛生芽分株转入生根培养基中，培养环境同诱导愈伤组织条件相同，观察生根情况。生根后移栽在泥炭：珍珠岩=3：2的混合基质中。 　　2培养基的配制 　　2.1启动培养基 　　①MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L（单位下同）。 　　②MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。 　　③MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。 　　2.2增殖培养基 　　①MS+6-BA1.5+NAA0.1mg/L。 　　②MS+6-BA1.5+NAA0.05mg/L。 　　③MS+6-BA1.0+NAA0.1mg/L 　　④MS+6-BA1.0+NAA0.05mg/L。 　　2.3生根培养基 　　①1/2MS+IBA0.3mg/L。 　　②1/2MS+IBA0.6mg/L。 　　③1/2MS+IBA0.9 mg/L。 　　④1/2MS+IBA1.2 mg/L。 　　3结果与分析 　　3.1光照温度控制 　　经试验橡皮树组织培养对温度、光照条件的要求不太严，一般在自然散射光照射下，幼苗在玻璃瓶内生长很好，最适宜的温度范围在18～28℃。 　　3.2芽的启动及增殖培养 　　将橡皮树的外植体接种于启动培养基中，20天后观察芽丛分化情况。试验结果表明，激素浓度的不同，对橡皮树启动培养基有明显的影响。在NAA浓度为一定值的情况下，6-BA设置0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L各3种浓度，处理③的诱导率最高，为95%；处理①的诱导率最低，为80.33%。通过对平均芽数的统计分析可知，处理③与①间有显著差异，激素浓度的增高有利于芽的生长速度和健壮程度。由此可见，诱导橡皮树不定芽的启动培养基③MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L是最佳培养基组合，培养效果见表1。 　　25天后，切去长约0.5cm、饱满、带有腋芽的茎段，接种到4种培养基上，18d液芽开始萌动，同时在茎段的基部四周出现黄白色较致密的愈伤组织，茎段上端切口处（没与培养基接触）也出现少量黄白色愈伤组织。接种38d观察，茎段基部及上端切口处愈伤组织增多，液芽变长变绿。接种48d观察，液芽处有一对新叶出现，同时在基部增大的较致密的愈伤组织上可看到绿色芽点。这时将外植体取出，将液芽及时转到增殖培养基。接种后第28天观察芽丛分化情况。试验结果表明：6-BA浓度在1.0～1.5 mg/L和NNA浓度在0.05～0.1 mg/L范围内，不定芽都能增殖，而在MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的培养基上效果最好，增殖系数可达4.9，增殖培养结果见表2。 　　3.3不同浓度激素对橡皮树组培苗生根的影响 　　从橡皮树组培苗上截取长约2cm、粗壮而又生长良好的茎段，接种到4种培养基上，10～15d，接种茎段的基部、节间上开始出现不定根。随着时间的推移，根不断加粗增多，长成完整的再生植株，18d后观察生根情况。生根结果见表3。 　　试验结果表明：在4种生根培养基中均能长出根，即对培养基的要求不严格。但在1/2MS+IBA0.5mg/L中，组培苗的长势、生长量、生根的质量为最佳，可长出2.5～4.0cm长的粗壮根，生根率也达到最高。 　　3.4橡皮树组培苗的生根 　　将继代培养基上的无根幼苗，在无菌条件下，转移到生根培养基上培养，约7～10天即成幼植株。一般在根长0.1～0.5cm时，将幼苗移到瓶外，把沾带的培养液冲洗干净，然后移栽到经高温消毒的河沙与珍珠岩混合的基质上培养。 　　3.5生根组培苗的移栽 　　组培苗生根后先打开瓶口晾2～3天，洗净琼脂