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细菌毒力与细菌数量对鸡胚致死率的影响 摘要：将不同来源的鸡大肠杆菌梯度稀释后进行鸡胚致死率试验，探讨细菌毒力与细菌数量对鸡胚致死率的影响。结果表明，大肠杆菌菌数在100～1 000CFU范围内，菌数与其致病力间相关性不显著（P 0.05），鸡胚死亡率表现为菌株毒力的影响。 关键词：大肠杆菌：细菌数量：致病性 鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的鸡感染性疾病的总称，是养鸡生产中常见的一种传染病，易给养禽业造成严重的经济损失。菌株致病性通常采用雏鸡致死率检测，其结果受环境影响大，若采用鸡胚代替雏鸡，对环境条件要求低，本试验探讨了通过鸡胚致死率检测鸡大肠杆菌致病性的可行性。 1.材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种来源 SD5、SD6、SD24、SD26、SD27、SD30、SD31、SL3共8株采集于山东地区健康鸡粪便：cvcc1551、cvcc1553、cvcc1562、cvcc1568、01、078购于中国兽医药品监察所；02、新大、田大、北京1、北京3、贵州1分别为来自北京、黑龙江省、贵州省3个发病鸡场分离的强毒株，由东北农业大学预防兽医教研室保存；E1、E4、HLl、HL3、HL6、HL7、HL8、HL9、HL10、HL12、HL13、HL16、HL19、HL21、HL22、HL23、HL24、HL25、HL27、HL28、HL29、HL30、HL32、HL33、HL34共25株菌株从外观健康的不同雏鸡粪便中分离鉴定获得，由东北农业大学预防兽医教研室保存；BL21、TG1为感受态细菌。 1.1.2试剂 伊红美蓝培养基、麦康凯培养基、营养肉汤培养基、普通营养琼脂、生化试验鉴定管、各种生物化学试剂均购自青岛海博生物技术有限公司。 1.1.3试验动物 12日龄SPF鸡胚购于聊城阳谷。 1.2方法 1.2.1大肠杆菌的活化 按文献[2]方法进行，在无菌的条件下取待测的大肠杆菌，用接种环挑取平板上的单菌落，在普通营养肉汤中37℃摇床过夜培养10～12h至成熟期。 1.2.2大肠杆菌梯度试验 取高致病性菌株02和感受态菌株TG1，1000μL菌液4 000 r/min离心2 min，弃去上清液，取沉淀用生理盐水清洗2次，进行10倍倍比稀释。取0.1 mL稀释液经尿囊腔注射12日龄SPF鸡胚，每组10只，同时取0.1 mL稀释液涂板，做细菌计数。并做对照组，注射生理盐水，共注射10只。然后于37℃培养箱培养，记录每天的死亡数，至第四天，记录胚胎的死亡率。 1.2.3细菌数量与鸡胚致死率相关性试验 取47株不同来源的鸡大肠杆菌的菌液1 000μL，4 000r/min离心2 min，弃去上清液，取沉淀用生理盐水清洗2次，稀释至细菌数100-1 000 CFU。按“1.2.2”方法进行鸡胚致病性试验并记录结果，判断细菌数在100～1 000 CFU范围时，细菌数量与鸡胚致死率的相关性。 1.2.4不同来源的鸡大肠杆菌毒力试验 分别取高致病性菌株01、02、078、cvccl551、cveel553、cvc1562、cvee1568和非致病菌株BL21、TG1、E4，按“1.2.2”方法进行鸡胚致病性试验，记录鸡胚的死亡率。 1.2.5重复性试验 10 d后，选取HL22、HL24、E1、02、TG1，按“1.2.2”方法进行重复性试验。 2.结果与分析 2.1大肠杆菌梯度试验 由表1可知，高致病性菌株02菌数在103～105CFU范围内时，鸡胚死亡率随着菌数的升高而降低，其菌数在8-490 CFU范围内鸡胚死亡率随菌数的升高而升高：对于感受态菌株TG1，其菌数在103～106CFU范围内鸡胚死亡率随菌数的升高而降低，在10～104 CFU范围内鸡胚死亡率随菌数的升高而升高。注射生理盐水的对照组鸡胚在观察时间内没有死亡。结果表明，细菌菌数在100～1 000CFU范围内，高致病性菌株的鸡胚死亡率高达80%：而感受态菌株的鸡胚死亡率最高为30%，即注射菌数在100～1 000CFU范围内可区分高致病性菌株与无（或低）致病性菌株。 2.2细菌数量与鸡胚致死率相关性试验结果 各组鸡胚接种细菌后，胚胎死亡多集中于接种后的第二天和第三天，注射生理盐水的对照组鸡胚在观察时间内没有死亡，见表2。经Spss软件分析，大肠杆菌的菌数与其致病力间相关性不显著（P 0.590 0.05）。即注射大肠杆菌菌数在100～1 000CFU范围时，鸡胚致死率与注射菌数不相关。 2.3不同来源的鸡大肠杆菌毒力试验结果 高致病性菌株鸡胚死亡率高达40%-80%：而非致病性菌株的死亡率为0%～30%，注射生理盐水的对照组鸡胚在观察时间内均无死亡（表3）。由表2和表3可见，大肠杆菌菌数在100-1 000 CFU范围内时，鸡胚致死率与菌数不相关，与细菌毒力相关。 2.4重复性试