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纸层析法鉴定转氨基作用 三、步骤1.肝匀浆的制备取兔肝剪碎，在研钵中先加磷酸盐缓冲液１ml，待研匀后再加２ml缓冲液。２.取干净试管2支，分别标明测定管与对照管，按下表操作。 试剂（d）　　　测定管 　对照管 肝匀浆 　　　10 　　　10 　　　　　　37℃水浴 10min　　沸水浴 10min 丙氨酸 　　　10 　　　10 α-酮戊二酸　　　10 　　　 10 　　　　　　　　　37℃水浴 20min * * 一、目的 　　１.掌握氨基酸转氨基作用和纸层析的原理 　　２.熟悉纸层析的操作技术 二、原理 　１.氨基酸的转氨基作用 谷氨酸+丙酮酸 α-酮戊二酸+丙氨酸 谷丙转氨酶 　　２.层析理论 　　层析法：是利用混合物各组分物理、化学性（如溶解度、吸附能力、电荷和分子量等）的差别，使各组分在支持物上集中分布在不同的区域，借以将各组分分离。 　固定相——水 流动相——苯酚 由于混合物中的有效成分和杂质受固定相的阻力和受流动相的推力影响不同，各组分移动速度不同，有效成分和杂质在这两个相中连续多次地进行分配、吸附和交换作用，最终结果是使混合物得到分离。 2.点样 取直径13cm圆形滤纸1张，用圆规在滤纸正中作一半径为1cm的小圆圈作为层析底线，用铅笔通过圆心作两点互相垂直的线，并在两线外端等距离点4个原点，标明1、2、3、4。分别用毛细吸管吸取测定管上清液、对照管上清液、0.1M谷氨酸溶液、0.1M丙氨酸溶液各3滴，依次点在滤纸上标明1、2、3、4的原点处。注意点样斑点不可太大。直径应小于0.5cm，每点一滴，用吹风机吹干后方可再点第二滴，并且点样量应力求均匀相等。 [步骤] 3.层析 在滤纸圆心处打一小孔（如铅笔芯大小），另取同类滤纸小片1X2cm，下一半剪成须状。将此小片卷成圆筒如灯芯插入小孔（不要突出于滤纸面） 将滤纸放在培养皿上，灯芯下端浸入层析液中, 可见溶剂沿灯芯上升到滤纸，再沿滤纸以同心圆式向四周扩展，待溶剂前沿距滤纸边缘约1cm处（约45-60分钟），取出滤纸。去处灯芯立即用铅笔划出溶剂前沿，用吹风机吹干。