第一章分离与纯化精编.pptVIP

分离纯化工艺原理　 讲 授：谭朝阳 邮箱：tomtzy123@163.com 第一章　分离与纯化概论 第一节　分离纯化技术在生物制药中的地位 如何获取某种生物药物的产品？ 基因工程、蛋白质工程　　菌种构建　　　上游 　 微生物发酵工程 酶工程　　　　　　　　　产物积累　　　中游 动植物细胞培养工程 分离工程　　　　　　　　产物纯化　　　下游 生物技术下游加工过程 Downstream Processing 下游加工过程：从发酵液、酶反应液、或动植物细胞培养液中分离、纯化生物产品的过程。 分离纯化方法复杂，技术要求高，成本昂贵 下游加过程的成本： 　氨基酸：下游投资为发酵部分的1.5倍 　抗生素：下游投资为发酵部分的4倍 　基因工程药物（如重组蛋白质）：占整个生产费用的80%-90% 第二节　生物技术下游加工过程的特点 一、发酵液（培养液）是复杂的多相体系，含固体、液体、气体、胶状物质等，多组分的混合物 。 细胞：蛋白质、核酸、多糖、脂类等 代谢产物：目标产物、中间产物、前体 未用完的培养基 预处理的添加物 组分复杂(a 大分子;b 小分子;c 可溶物;d 不可溶物;e 化学添加物 二、产物浓度很低 几种典型产品发酵液的浓度 三、产物的稳定性差 （1）化学降解：温度、pH值、有机溶剂 　　蛋白质：辅助因子、空间构型 　　手性分子：外消旋 （2）微生物降解：细胞中存在降解酶 　容易腐败、染菌、被微生物的活动分解或自身的酶所破坏，机械搅拌、空气、日光等对生物物质的活性都会发生影响。 　措施：低温、快速操作（时间短），pH适中、勤洗消毒（防止染菌污染）等 四、分批操作，生物变异性大 生物材料组分数量大，分离困难 目标产物与杂质的理化性质如溶解度、相对分子量、等电点都十分相近，分离与纯化比较困难 五、终产品的质量要求很高 青霉素：青霉噻唑蛋白RIA值（放射免疫分析值）＜100（相当于1.5×10－6） 蛋白质药物：杂蛋白＜2% 重组胰岛素：杂蛋白＜0.01% 收率低、成本高 稳定性差，收率低，损失大 分离纯化方法复杂、昂贵 下游加过程的成本： 　氨基酸：下游投资为发酵部分的1.5倍 　抗生素：下游投资为发酵部分的4倍 　基因工程药物（如重组蛋白质）：占整个生产费用的80%－90% 生物技术下游加工过程特点 第三节　传统生物产品的分离纯化方法 分离纯化可分四个阶段： 1、发酵液的预处理和固液分离 2、初步分离（提取） 3、高度纯化（精制） 4、成品加工 ① 细胞回收技术: 絮凝，离心，过滤，微过滤。 ② 细胞破碎技术: 球磨，高压匀浆，化学破碎技术 ③ 初步纯化技术: 吸附剂，离子交换，沉淀（盐析 法，有机溶剂沉淀，等电点，沉淀剂），溶剂萃 取，两水相萃取，超临界萃取，逆胶束萃取，膜 分离技术 ④ 高度纯化技术: 各类层析，亲和，疏水，聚焦，离 子交换，结晶 ⑤ 成品加工：浓缩，除菌与热原，喷雾干燥，气流干 燥，沸腾干燥，冷冻燥 分离纯化的一般工艺流程 单元操作 1、发酵液的预处理和固液分离 　发酵液预处理的目的在于改变发酵液的性质，以利于固液分离。 降低发酵液的黏度：酸化、加热等 　凝聚和絮凝技术：聚结成较大颗粒，加速固液分离 　　 固液分离 　固液分离基本的单元操作：过滤和离心 　错流膜过滤技术：减少过滤介质阻力 板框压滤机 鼓式真空过滤机：较粗的真菌菌丝体 倾析式离心机：含固体量较多的发酵液 细胞破碎和碎片分离 　如产物在细胞内，还要进行细胞破碎 　高压匀浆器：利用液相剪切力与固定表面撞击所产生的力。 　高速球磨机：研磨 　实验室还可用化学、酶解、干燥等方法 　碎片分离：离心、双水相萃取 单元操作 2、初步分离（提取）：除去与产物性质差异大的杂质，使产物浓度和质量提高。 　可选范围广：吸附、萃取、沉淀等 3、高度纯化（精制）：与（2）类似 　层析、电泳等 4、成品加工：浓缩、结晶、干燥等 溶剂萃取法 目标产物不同的化学状态存在时，在水中及与水不互溶的溶剂中有不同的溶解度。 青霉素在酸性下成游离酸，在醋酸丁酯中溶解度较大，使之从发酵液中转移到醋酸丁酯相中。 　在中性成盐的条件下，在水中溶解度大，再从醋酸丁酯中转移至水相。 离子交换分离法 利用离子交换树脂和目标产物之间的化学亲和力（电荷），有选择性地将产物吸附上去，然后改变条件将其洗脱下来，以达到浓缩和提纯目的。 吸附分离法 利用吸附剂与产物之间的分子引力将产物吸附在吸附剂上，再选用洗脱剂将其洗脱下来。 活性炭、硅胶、氧化铝、大孔吸附树脂 选择性较差、可逆性较差、劳动强度大 沉淀分离法 加入一些无机或有机离子或整个分子，能与目标产物形成不溶解的盐或复合物而自发酵液中沉淀出来。 发酵单