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西瓜未授粉子房的离体培养 　　摘 要：为了探讨西瓜未授粉子房诱导率的影响因素，以‘早春红玉’、‘西农9号’和‘小绿皇’为供试材料进行西瓜未授粉子房的离体培养，研究供体植株的黑暗热激处理、基因型、不同取样时间、2，4-D浓度和不同激素浓度组合等因素对其芽点诱导率的影响。结果表明：西瓜未授粉子房离体培养以33 ℃ 的条件下黑暗热激4 d效果最佳；以开花前1 d的子房诱导率最高为17.2%；3个品种中仅‘早春红玉’获得了再生植株，且在激素组合为4.0 mg?L-1 2，4-D + 2.0 mg?L-1 6-BA+0.5 mg?L-1 NAA时芽点率最高为15.0%；根据再生植株的根尖染色体数目，初步鉴定再生植株中有单倍体植株，还有二倍体和四倍体植株。 　　关键词： 西瓜； 未受粉子房； 诱导率； 离体培养； 单倍体； 影响因素 　　长期以来，西瓜常规育种周期长、工作量大、遗传性状不稳定等因素在很大程度上限制了西瓜的育种进程。在离体条件下，采用未授粉子房培养来获得单倍体植株，是在较短时间内获得综合性状优良、高度纯合二倍体的快速而有效的方法。目前，在葫芦科的一些作物上已经通过未授粉胚珠或子房的离体诱导培养途径成功获得了单倍体的植株。杜胜利[1]在黄瓜未受精子房的离体培养研究上得到了单倍体植株，并己将研究应用到黄瓜的新品种选育上。2009年，葛志东[2]在西葫芦未受精的子房培养中也得到了单倍体的植株。但是在西瓜上这方面的报道甚少。只有杨颖[3]通过未授粉的胚珠离体培养途径成功获得了3个具有再生能力的胚状体，得出胚状体R2为单倍体。因此，本试验探究了基因型、取样时间、黑暗热激以及激素浓度等因素对西瓜未授粉子房离体诱导培养的影响，以期找到最佳的诱导条件。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　未授粉子房离体培养以‘早春红玉’、‘西农9号’和‘小绿皇’3个西瓜品种为材料。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 外植体的准备及接种 自第2朵雌花开放开始，每天上午8：00左右取样。在无菌条件下用75%的酒精浸泡30 s，0.3%的次氯酸钠浸泡灭菌10 min，无菌水冲洗3次。然后将子房两端各切除约1 cm、刮去子房的表皮，将去皮后的子房横切成2 mm左右的薄片，平放在培养基中。每瓶接种子房片6～10块，每个处理接种3瓶，3次重复。 　　1.2.2 取样时间 分别取开花前2 d、开花前1 d和开花当天的子房作为试验材料，比较不同取样时间对诱导率的影响。培养基为MS+3.0 mg?L-1 2，4-D+1.0 mg?L-1 6-BA+0.5 mg?L-1 NAA。 　　1.2.3 黑暗热激 以上述3种西瓜基因型品种的开花前1 d的子房作为材料，接种后的子房块置于33 ℃暗培养，热激时间设为3、4、5、6、7 d 5个水平。以25 ℃黑暗处理4 d 为对照。置光照条件下培养1周后，统计接种子房出胚数量。 　　1.2.4 西瓜未授粉子房的胚状体诱导培养基的筛选 先用1.0 mg?L-16-BA+0.5 mg?L-1NAA对2，4-D浓度进行筛选，2，4-D浓度设为2.0、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mg?L-16个处理水平。将选出的诱导率较高的2，4-D浓度与不同浓度的6-BA和NAA浓度进行组合试验比较，从而选出最佳激素浓度组合。NAA浓度为0.1、0.5 mg?L-1；6-BA浓度为0.5、1.0、2.0 mg?L-1。 　　1.2.5 西瓜未授粉子房的分化培养基 子房在诱导培养基上培养3周左右，产生明显的愈伤组织，将愈伤组织转移至诱导分化的培养基上继续进行诱导培养。分化培养基为：6-BA浓度设为0.2、0.5、1.0 mg?L-1 3个水平；NAA浓度设为0.1、0.2、0.5 mg?L-1 3个水平。每瓶接种有效愈伤2～3块，每个处理接种3瓶，3次重复。 　　1.2.6 倍性鉴定 采用染色体计数法确定再生植株的倍性。 　　1.3 数据统计与分析 　　雌核启动率/%=（出胚的子房片数量/总接种子房片数量）×100 　　芽点诱导率/%=（分化出芽点的愈伤数量/总接种子房片数量）×100 　　试验数据用Excel 和SPSS统计分析软件进行统计和分析。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同基因型品种对西瓜未授粉子房诱导率的影响 　　基因型对西瓜未授粉子房的离体诱导培养有很大的影响，本试验所选的3个西瓜品种在相同培养条件下雌核启动率芽点诱导率差异很大，以‘早春红玉’的芽点诱导率最高为22.2%，其次是‘西农9号’的芽点率为10.8%，而‘小绿皇’没有诱导出胚状体。但是最后仅‘早春红玉’分化出了再生植株。因此，在相同的培养基及培养条件下，基因型不同，各品种的诱导效果也不同，这可能与品种的生理特