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酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化及活性分析 　　摘要：以瞬时表达酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）的豌豆（Pisum sativum L.）为试验材料，提取豌豆中可溶性总蛋白质，利用Western blot方法检测目的蛋白质，结果表明豌豆可成功表达aFGF；采用肝素亲和柱层析法分离目的蛋白aFGF，并用MTT法检测aFGF的生物学活性，结果表明豌豆中表达的酸性成纤维细胞生长因子具有促细胞分裂活性。 　　关键词：豌豆（Pisum sativum L.）；酸性成纤维细胞生长因子；分离；纯化；活性 　　中图分类号：Q812 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）17-4211-03 　　Separation， Purification and Bioactivity of Acidic 　　Fibroblast Growth Factor 　　FAN Ya-jun， NI Xiu-zhen 　　（Department of Biology， Changchun Normal University， Changchun 130032， China） 　　Abstract： The pea（Pisum sativum L.） plants expressing the foreign protein aFGF were used to extract the total soluble proteins. Western blot was performed to identified the aFGF protein. Heparin-affinity chromatography was used to separate and purify the aFGF. The bioactivity of the aFGF purified was analyzed by MTT. The result of western blot confirmed that the exogenous protein aFGF was expressed and purified successfuly from pea plants. The MTT results showed that the pea plants derived aFGF had the mitogentic activity. 　　Key words： pea（Pisum sativum L.）； aFGF； separation；purification； bioactivity 　　酸性成纤维细胞生长因子（Acidic fibroblast growth factor，aFGF）是一种重要的有丝分裂原，在胚胎发育期间能够促进细胞分裂、增殖并参与细胞的迁移与分化[1，2]。有研究表明，aFGF可以通过促进溃疡底部血管增生而使溃疡得以快速修复，另外在受损的大脑皮质中内源性的酸性成纤维细胞生长因子及其受体表达水平均有提高，这说明aFGF在伤口愈合、神经系统的保护及再生过程中具有重要作用[3，4]。基于aFGF在机体发育及多种伤病治疗中的功能，选择高效、安全的生产平台表达酸性成纤维细胞生长因子对基础研究及医疗方面均具有重要意义，而利用植物作为生产平台瞬时表达药用蛋白质是当前生物技术领域的一个研究热点[5-9]，本研究以瞬时表达酸性成纤维细胞生长因子的豌豆（Pisum sativum L.）为试验材料，提取植物可溶性总蛋白质，利用肝素亲和柱层析法分离了外源蛋白质aFGF，并对目的蛋白质的生物学活性进行了分析，为研究酸性成纤维细胞生长因子提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　豌豆种子购买于长春市市场，瞬时表达酸性成纤维细胞生长因子的豌豆植株由长春师范大学分子生物学实验室构建完成，小鼠胚胎成纤维细胞（NIH3T3细胞）由本实验室保存。 　　肝素琼脂糖凝胶（Heparin SepharoseTM CL-6B）购自北京鼎国生物技术有限公司，Microcon YM-10超滤管购自美国Millipore公司，蛋白质杂交所用二抗-辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG购自北京中山生物技术有限公司，低分子量蛋白质预染Marker购自北京鼎国生物技术发展中心，化学发光检测试剂盒Super Singnal West Pico Trial Kit购自Pierce公司，IMDM培养基、标准品aFGF购自美国Sigma-Aldrich公司。 　　蛋白质磷酸盐（PBS）提取缓冲液配制：8 g NaCl、0.2 g KCl、1.42 g Na2HPO4、0.27 g KH2PO4、pH 7.4。 　　1.2 方法 　　1