高效液相色谱法测定复方莲草颗粒中槲皮素的含量.docVIP

高效液相色谱法测定复方莲草颗粒中槲皮素的含量 　　【摘 要】目的：建立复方莲草颗粒中槲皮素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱为Diamonsil C18（4.6mm×250mm，5μm），甲醇-0.4%磷酸（50：50）为流动相；流速为1ml/min；检测波长为366nm；柱温为30℃。结果：槲皮素在0.1004μg-1.004μg范围内与峰面积呈良好线性关系Y=27878x-4733.6，r=0.9999，平均加样回收率为99.84%，RSD=2.72%。结论：该法简便、准确、可靠，可作为复方莲草颗粒的质量控制指标之一。 　　【关键词】白花蛇舌草；槲皮素；含量测定；高效液相色谱法 　　原发性支气管肺癌是起源于支气管黏膜或腺体的恶性肿瘤[1]。目前研究认为肺癌的发生与正气虚弱、脏腑功能失调有关。莲草颗粒为多年临床经验方，由白花蛇舌草、半枝莲、人参等三味中药组成，共奏清热解毒，利水消肿，固本益气之功效。主要用于肺癌的辅助治疗。白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草 Hedyotis diffusa Willd. 的干燥全草，广泛分布于亚热带地区，我国的广西、福建、湖南、安徽、云南等地均有生长[2]。主要含有多糖、黄酮和蒽醌类等成分[3]。具有清热解毒，消痈散结，利尿消肿、抗菌消炎、抗肿瘤、调节免疫功能等功效[4-5]。本文采用高效液相色谱（HPLC） 法测定白花蛇舌草的槲皮素含量，为其质量控制标准提供了研究数据。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与药品 　　岛津LC-10AT型高效液相色谱仪，EL-204型电子分析天平，TP-150 超声波清洗机。实验所用到的药材饮片全部从长春市宏检药材公司购买，经过鉴定全部符合药典标准；槲皮素（C15H10O7）由中国药品生物制品检定所提供（批号：100081-200907）；甲醇为色谱纯（美国Fisher公司），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 　　1.2 制备工艺 　　莲草颗粒由白花蛇舌草、半枝莲等几味中药组成。取上述几味中药，加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.05～1.10（40～50℃），以8000r/min离心20min，取上清液，减压干燥，粉碎。干法制粒送料变频10，压力变频20，制粒变频15，制成颗粒1000g，即得。 　　1.3 色谱条件 　　色谱柱为Diamonsil C18（4.6mm×250mm，5μm），甲醇-0.4%磷酸（50：50）为流动相；检测波长为366nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，进样量为10μl。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500。 　　1.4 溶液的制备 　　1.4.1 对照品溶液 　　取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.05mg/ml的溶液，即得对照品溶液。结果见图1。 　　1.4.2 供试品溶液 　　取本品粉末（过三号筛）1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲醇10ml、25%盐酸溶液5mL，摇匀，置水浴中加热回流30min，迅速冷却至室温转移至50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见图2。 　　1.4.3 阴性样品溶液 　　按莲草颗粒处方比例，取白花蛇舌草以外的药材，依照工艺流程项下方法制得阴性样品。按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。结果见图3。 　　2 结果与分析 　　2.1 线性关系试验 　　分别精密吸取槲皮素对照品溶液2μl、5μl、10μl、13μl、15μl、20μl，依“1.3”色谱条件进样，测定峰面积。以槲皮素进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程为：Y=27878x-4733.6，r=0.9999。槲皮素在 0.1004μg～1.004μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。 　　2.2 精密度试验 　　取槲皮素对照品溶液，连续进样6次，进样量为10μl，测定其峰面积。计算相对标准偏差RSD=0.33%，表明进样方法和仪器精密度良好。 　　2.3 稳定性试验 　　取槲皮素对照品溶液和供试品溶液，分别于2、4、6、8、10、12小时进样，进样量10μl，槲皮素对照品和供试品溶液RSD值分别为1.72%和1.94%，二者在12h内稳定性较好。 　　2.4 重现性试验 　　精密称取同一批样品6份，按“1.4.2”配制供试品溶液进行测定，计算槲皮素含量，RSD=2.1608%，符合要求。 　　2.5 加样回收率 　　精密称取6份与重现性试验同批次的样品0.5g