11DNA重组技术的基本工具李学彬.pptVIP

目 录 专题1 基因工程 专题2 细胞工程 专题3 胚胎工程 专题4 生物技术的安全性和伦理问题 专题5 生态工程 转基因食用油 超级绵羊 基因工程产品 基础理论和技术的发展催生了基因工程 技术发明使基因工程的实施成为可能 1.基因转移载体的发现 2.工具酶的发现 3.DNA合成和测序技术的发明 4.DNA体外重组的实现 5.重组DNA表达实验的成功 6.第一例转基因动物问世 7.PCR技术的发明 基因工程中的关键词 目的基因 标记基因 受体细胞 感受态细胞 限制酶 DNA连接酶 磷酸二酯键 黏性末端 平末端 质粒 重组质粒 运载体 表达载体 基因组文库 cDNA文库 T-DNA 基因探针 启动子 终止子 转化 表达 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射法 氯化钙处理法 分子杂交技术 DNA分子杂交技术 DNA-mRNA分子杂交技术 抗原-抗体杂交技术 基因工程 转基因抗虫棉 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 1.1 DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1.限制性核酸内切酶（限制酶） ——“分子手术刀” 限制性内切酶 切割后的形式：2种，分别为：黏性末端和平末端 什么叫平末端？ 实例 1： 1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A.限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中少 B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C.不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D.限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 2. DNA连接酶－－“分子缝合针” 1.作用： 2.种类： 3.实例2、见课本P5，图1-4，回答下列问题： （1）EcoR I是一种 酶，其识别序列是 ，切割位点是 与 之间的 键。切割结果产生的DNA片段末端形式为 。 （2）不同来源DNA 片段结合，在这里需要的酶应是 连接酶，此酶的作用是在 与 之间形成 键而起“缝合”作用的。还有一种能连接平末端的连接酶是 。 实例3 以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析： ①GC… ②AATTC… ③ …GC ④ …CTTAA CG… G… …CG …G (1)其中①和 是由一种限制酶切割形成的 末端，两者要重组成一个DNA 分子，所用DNA连接酶通常是 。 （2） 和 是由另一种限制酶切割形成的 末端，两者要形成重组DNA片段，所用的连接酶通常是 。 3 .基因进入受体细胞的载体－“分子运输车” 1.使用载体的目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中；二是利用它在宿主细胞内进行大量的复制。 2.载体的种类：（1）质粒 （2）λ噬菌体的衍生物 （3）某些动植物病毒 基因工程中常用的运载体——质粒 基因进入受体细胞的载体 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 作为运载体的条件 （1）必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 （2）必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到运载体上去。 （3）必需带有标记基因，以便重组后进行重组DNA分子的辨认和筛选。 （4）必需是安全的，不会对受体细胞有害，也就是能够安全地“借居”在受体细胞中。 （5）分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 本节内容小结： 1.知识梳理： DNA重组技术的基本工具： ①限制酶（分子手术刀）：识别特定的核苷酸序列并切割两核苷酸之间的磷酸二酯键； ②DNA连接酶（分子缝合针）：连接两核苷酸之间的磷酸二酯键； ③基因进入受体细胞的载体（分子运输车）：最常用的是细菌质粒，还有λ噬菌体的衍生物、动