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专题一 基因工程 一、基因工程的概念 基因工程是指：按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 DNA 重组和转基因技术，赋予生物以 DNA 分子水平上 DNA 重组技术。 1．“分子手术刀”——1）来源：2）功能：（3）种类：约 4000 种， EcoRI 限制酶：识别 SmaI 限制酶：识别 6 个核苷酸，在 （4）结果：经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式：在中轴线两侧切开时产生的 ；在中轴线处切开时产生的是 。 练习 1：在下列 DNA 片段图上表示出 EcoRI 限制酶的切割位点: 2：写出下列黏性末端的另一个片段： 2．“分子缝合针”——1）功能：缝合 2）与 DNA 聚合酶作用的异同： DNA 聚合酶只能将 DNA 连接酶是连接DNA 聚合酶是以DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链 (不能连接单链DNA)，因此DNA连接酶不需要模板。 3）分类：（两类） EcoliDNA连接酶：来自 DNA 片段 DNA的 ； T4DNA 连接酶：来自 DNA 片段 3．“分子运输车”——1）运载体具备的条件： ② ③ （2）最常用的运载体：,它是一种裸露的、结构简单的、位于细菌 （3）其它载体： 1．基因工程的设计施工是在什么水平上进行的 A．细胞B．细胞器C．原子D．分子 2．下列关于限制酶的说法不正确的是 A．限制酶主要是从原核生物中分离纯化来的 B．不同的限制酶识别不同的核苷酸序列 C．限制酶能识别不同的核苷酸序列，体现了酶的专一性 D．限制酶的作用只是用来提取目的基因 3 A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B．限制性内切酶的活性受温度影响 C．限制性内切酶能识别和切割 RNA D．限制性内切酶可从原核生物中提取 4．下列关于 DNA 连接酶作用的叙述正确的是 A．将单个核苷酸加到某 DNA 片断末端，形成磷酸二酯键 B．将断开的两个 DNA 片断的骨架连接起来，重新形成磷酸二酯键 C．连接 DNA 两条链上碱基之间的氢键 D．只能将双链 DNA 片断互补的黏性末端连接起来，而不能将双链片断的平末端进行连接 5．一种限制酶切割 DNA 时，切出的 DNA 末端是A．只有平末端B．只有黏性末端 C．既有黏性末端，又有平末端D．只有黏性末端或只有平末端 6．关于 DNA 重组技术中基本工具的叙述正确的是 A．限制酶的作用部位是特定两个核苷酸之间的氢键 B．目的基因经限制酶切割后一定会形成黏性末端 C．DNA 连接酶是在两个 DNA 片段之间形成磷酸二酯键 D．质粒 DNA 分子上一定含有抗四环素基因 7．不属于质粒被选为基因运载体的理由是A．能复制B.有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状 DNA 8．下列关于质粒的叙述，正确的是 A．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B．质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状双链 DNA 分子 C．质粒只有在侵入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制 D．细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行 9．下列平末端属于同一种限制酶切割而成的是 A．①③B．①④C．②③D．②④ 10．在基因工程中用来修饰改造生物基因的工具是 A．限制酶和连接酶B．限制酶和水解酶C．限制酶和运载体D．连接酶和运载体 11．关于 DNA 连接酶和 DNA 聚合酶的叙述,错误的是 A．都是连接双链 DNA 的缺口，而不能连接单个核苷酸 B．都能形成磷酸二酯键 C．DNA 连接酶不需要模板，DNA 聚合酶需要模板 D．DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上G↓ GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是 —↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。 1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 2）请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。 3）在 DNA 连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？为什么？ 第一步： 1．目的基因是指：2．获取目的基因的方法 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含 ② PCR 是指聚合酶链式反应，是一项在1988年由 发明。 PCR 技术的原理是 利用 PCR 技术进行 DNA 扩增需要加入的物质有： PCR