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- 2017-03-20 发布于重庆
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(PAS反应与联苯胺反应)
实验三 PAS反应与联苯胺反应
一:实验目的:
掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。
二:实验原理:
1、高碘酸—希夫试剂反应简称PAS(Periodic Acid Schiff reaction)反应。组织内的多糖等都用PAS法来显示。其化学基础是利用过氧酸的氧化作用打开C—C键,将CH2OH—CH2OH变成CHO—CHO。同样,对CH2OH—CHO,CH2OH—COOH,CH2OH—CH2NH2等物质均有氧化作用而放出醛基,这种新生的醛基和无色品红作用形成紫红色化合物(见图1)。颜色的深浅与糖类的多少有关。
2、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类化合物氧化为有色化合物(见图2),用联苯胺处理样本,细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为兰色的苯胺蓝,进而变为棕色产物,因而可以根据颜色反应来判断过氧化物酶的有无或多少。
三:实验材料与试剂
材料:土豆块茎、洋葱根尖或鳞茎表皮。
器具:显微镜、载波片、单面刀片、培养皿、镊子、染色钵、盖玻片、吸水纸。
试剂:
过碘酸酒精溶液: 过碘酸(高碘酸) 0.4g 95%酒精 35ml 0.2 mol/L醋酸钠 5ml (即17.2g醋酸钠溶于1000ml 蒸馏水) 蒸馏水 10ml 该液需保存于冰箱,包黑纸,如变黄则失效。
Shiff试剂(详见指导书P75页)
0.1%钼酸铵溶液:称取0.1 g钼酸铵溶于100 ml 0.85%盐水
联苯
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