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四君子护康颗粒长期毒性试验 四君子汤，是人参、白术、茯苓、甘草四味基本中草药为主的古方剂，主治脾胃气虚。该方为治疗脾胃气虚证的基础方，後世众多补脾益气方剂多从此方衍化而来。临床应用以面白食少，气短乏力，舌淡苔白，脉虚弱为辨证要点。四君子汤是从《伤寒论》中的“理中丸”脱胎，把原方中秉性燥烈的干姜去掉，换成了性质平和的茯苓，由驱除大寒变成温补中气。方中只人参、白术、茯苓、甘草四味，不热不燥，适度施力，从了“君子致中和”的古意。利用现代制药工艺技术，将本方改型为颗粒剂，克服了汤剂的缺陷[1]。但是它的现代药理学长期毒性实验研究却未见报导。 1实验材料 1.1药物四君子护康颗粒制剂，由安徽中医学院药学院中药药理实验室及安徽中医学院中药实验室提供。 1.2动物Wistar大鼠80只，体重120～200 g，6～8周龄，雌雄各半，由内蒙古大学实验动物研究中心提供，清洁级，饲料也为该中心销售的固体饲料，自由饮水。饲养条件：安静、清洁、通风、室温22±2℃、湿度：60±10%。 1.3主要试剂及仪器电子秤、灌胃器、10 ml注射器、乙醚、抗凝管、干燥管、血管夹、组织剪、ABOTT1700全自动血细胞分析仪、HITACH7060全自动生化分析仪、10%福尔马林溶液、石蜡、OLYMPUS H32103型光学显微镜（JAPAN 706093），切片机（浙江金华益迪无线电厂），精细天平（FA1104上海天平仪器厂）。 2方法[2-3] 2.1动物分组将动物随机均匀分为大、中、小剂量组和对照组，每组20只，雌雄各半，每笼5只饲养。 2.2给药剂量剂量设置依据参考人临床用量与大鼠间进行换算。①大剂量组：10.2g/kg(50倍量)；②中剂量组：3.26g/kg(16倍量)；③小剂量组：1.02g/kg(5倍量)；④对照组：不给药。 2.3给药容量、途径及时间用药组按剂量将药物以5ml水配制成溶液，于每天上午8～10时，灌胃给药，连续给药90天。 2.4观察指标①一般状况观察每天观察体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便、摄食量，每周称体重1次。②血液学指标观察用药45天后，每组尾尖采血，用ABOTT1700全自动血细胞分析仪检查血常规(红细胞、血红蛋白含量、白细胞计数、淋巴细胞绝对值、血小板、红细胞压积、红细胞分布宽度、平均红细胞体积等)；用药90天后，乙醚麻醉动物，心脏取血，送检验科行血液学指标和血液生化学指标检查，处死动物，再进行尸解。③血液生化学指标谷草转氨酶（GOT），谷丙转氨酶（GPT），碱性磷酸酶（ALP），尿素氮（UK），肌酐（CR），总蛋白（TP），白蛋白（ALB），血糖（GLU），总胆红素（T-BILI），总胆固醇（CHO），凝血时间（CT）。④系统尸解及计算脏器系数对所有动物进行尸解，取脏器。对脏器进行称重，并计算脏器系数(脏器系数=脏器湿重/动物体重×100)。⑤病理组织学检查对所有动物进行病理组织学检查，所检查的脏器和组织为：心、肝、脾、肺、肾、胃、睾丸、卵巢、胸腺。经10%中性福尔马林固定，取材作常规石蜡制片，切片厚度约3～4μm，H-E染色，用OLYMPUS H32103型光学显微镜（JAPAN 706093）进行观察并对相关组织照相。杀动物前24小时予禁食。乙醚麻醉动物，取脏器称重，并取病理组织学检查所需的脏器和组织。 2.5统计方法统计资料用均数土标准差(x士s)表示，数据用SPSS 12.0统计软件进行处理，体重数据采用重复测量的方差分析。 3结果 3.1一般观察给药期间，各剂量组和对照组大鼠的行为、自主活动、摄食、饮水、毛发、粪便（大剂量组有稀便）、尿液均未见异常，眼、耳、鼻、口未见异常分泌物，各组动物均无异常死亡发生。表1显示各时间点的体重变化，各剂量组之间差异无显著性意义(P＞0.05)。食量变化情况,第1周空白对照组与其他3个剂量组之间差异有显著性意义(P＜0.05),空白对照组数值较高，其余各时间点的剂量组之间的食量差异无显著性意义(P＞0.05)；从对大鼠的一般观察结果来看，该药未出现毒性反应。 3.2血液学指标结果显示45天大鼠血液学指标中，中剂量组淋巴细胞绝对值（LYM）与空白剂量组间有显著性差异（P＜0.05），中剂量组淋巴细胞绝对值（LYM）较空白剂量组稍低（正常范围内）[4]，但无临床意义。其余各剂量组血液分析各项指标与空白组无显著性差异。90天大鼠血液学指标中，中剂量组白细胞总数（WB5-25），淋巴细胞绝对值（LYM）与空白对照组有显著性差异（P＜0.05），数值较其他剂量组稍低（正常范围内）但无临床意义。 3.3血液生化学指标结果如表2显示，血肌酐（CR）大剂量组与空白对照组间有显著性差异（P＜0.05），低剂量组与空白对照组有显著性差异（P＜0.05），大剂量组、低剂量组（CR）数值均