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混菌固态发酵产纤维素滤纸酶条件的研究 　　摘要：以稻草粉和麸皮为主要原料，利用拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）和黑曲霉（Aspergillus niger）（1∶1）混菌固态发酵产纤维素滤纸酶。以初始pH、发酵时间、发酵温度、接种量、装样量、含水量为研究因子，通过对拟康氏木霉和黑曲霉（1∶1）混菌固态发酵产纤维素滤纸酶的最佳发酵条件进行优化，优化后的最佳产酶条件为：固体培养基含水量为50%，初始pH 5.0，装样量15 g/500 mL，接种量为8%，30 ℃恒温培养5 d。 　　关键词：固态发酵；纤维素滤纸酶（FPA）；拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）；黑曲霉（Aspergillus niger） 　　中图分类号：Q939.97 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）04-0889-03 　　Cellulase-Producing Conditions by Solid-State Fermentation of Mixed Strains 　　HUANG Fang-Yi，KE Xia 　　（Department of Biotechnology， Wuhan Bioengineering Institute，Wuhan 430415， China） 　　Abstract： Cellulase were produced by solid-state fermentation taking straw and wheat bran as the main raw materials by mixed strains Trichoderma pseudokoningii and Aspergillus niger with the ratio of 1∶1. The fermentation conditions such as the initial pH， fermentation time， cultivation temperature， inoculation dose， medium dose and water content were aptimized by orthogonal experiment. The results showed that the optimized producing conditions of cellulose were， water content in medium， 50%； initial pH 5.0； medium dose， 15 g/500 mL； inoculation dose 8%； culture temperature， 30 ℃； fermenting for 5 d. 　　Key words： solid-state fermentation； cellulase； Trichoderma pseudokoningii； Aspergillus niger 　　纤维素是一切植物的主要成分，是地球上最丰富最廉价的可再生资源。如何提高富含纤维素的工农业废弃物的利用率已成为近年来研究的热点[1-3]。目前，中国纤维素滤纸酶生产主要是利用纯种进行单菌固态或液态发酵，而混菌发酵可相互补充，促进纤维素类物质的分解，近年来混合菌的作用逐渐受到重视。涂璇等[4]、胡奎娟等[5]、邹水洋等[6]、王志等[7]、苏香萍等[8]先后对混菌发酵产酶进行了研究。该研究以纤维素滤纸酶活（FPA）为指标，探讨了拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）和黑曲霉（Aspergillus niger）混菌固态发酵产纤维素滤纸酶过程中培养条件对产酶的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 菌种 拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）购于ACCC（中国农业微生物菌种保藏管理中心），菌株编号30940；黑曲霉（Aspergillus niger）保存于武汉生物工程学院发酵工程实验室。 　　1.1.2 培养基 斜面培养基：PDA培养基；固体发酵培养基：稻草70 g、麸皮30 g、Mandels营养液[（NH4）2SO4 2.5 g，KH2PO4 2.0 g，MgSO4?7H2O 2.0 g，NaNO3 0.2 g，FeCl3 0.02 g，1 000 mL水，pH 5.0]100 mL。混匀后121 ℃、30 min灭菌备用。 　　1.2 方法 　　1.2.1 稻草预处理 稻草烘干，剪至3 cm左右，经烘干粉碎过 80目筛备用。 　　1.2.2 培养方法 将在斜面上培养3 d的拟康氏木霉菌株