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题 目 麦草畏及2,4-D对西洋参体细胞胚胎发生比较研究 学生姓名 胡云杰 学号 111座机电话号码 所在学院 生物科学与工程学院 专业班级 生物科学专业11级02班 指导教师 曹小勇 完成地点 资源生物重点实验室组织培养室 2015年 6月8日 麦草畏及2,4-D对西洋参体细胞胚胎发生比较研究 作者:胡云杰 （陕西理工学院 生物科学与工程学院 生物科学1102班，陕西汉中 723000） 指导教师：曹小勇 [摘要] 本研究以西洋参成熟种胚为材料，以MS培养基为基础培养基，附加 0.05-2 mg/L麦草畏，0.5mg/L 2,4-D以及0.5mg/L 2,4-D+0.5mg/L麦草畏组成八组培养基，对西洋参成熟种胚进行离体培养。评价麦草畏对体细胞胚胎发生的影响，确定麦草畏在西洋参体细胞胚胎发生中的作用，为西洋参快繁积累相关资料。材料培养40天后，在MS培养基上未形成愈伤组织及胚状体；在附加不同浓度麦草畏的培养基上，都能诱导出愈伤组织和胚状体，其中1mg/L麦草畏的效果最佳，愈伤率为94.34%，胚状体发生率为56.60%；在添加0.5mg/L 2,4-D的培养基上愈伤组织和胚状体发生率均为100%；在添加0.5 mg/L麦草畏和0.5 mg/L 2,4-D的混合培养基上，愈伤组织和胚状体发生率分别为95%,80%。实验结果表明，麦草畏可以诱导西洋参成熟种胚形成愈伤组织和胚状体，其中1mg/L麦草畏的诱导效果最佳，但是效果不及2,4-D，在与2,4-D混合使用时对比2,4-D单独使用的效果也有所降低。 [关键词] 西洋参；麦草畏；体细胞胚 引言 西洋参（American ginseng）又名花旗参、美国参，系五加科人参属多年生草本植物，原产于美国和加拿大。它含有多种生理活性物质，如西洋参皂苷、多糖、黄酮类、挥发油、微量元素等，其中属西洋参皂苷的生理活性最为显著。西洋参还具有镇静镇惊、安神促智、抗心律失常、抗休克、保护心肌、防血管硬塞、降血脂、增强机体免疫功能、抗应激、抗肿瘤、保肝的药理作用。我国自1975年10月开始有计划地引种西洋参，目前已形成了四大生态气候栽培区：东北栽培区、华北栽培区、华中栽培区和康滇栽培区。隶属于华中栽培区的陕西汉中地区从1978年引种栽培，获得成功[1-2]。西洋参生长缓慢,对生长环境要求严格，栽培技术复杂，存在种胚后熟现象，在自然状态下需要长达20-22个月才能打破休眠，常规育种方法很难满足生产上的需求[3]。到目前为止人们在西洋参的组织培养及体细胞胚胎发生方面已经做了较为深入和系统的研究，但至今尚未确立稳定的西洋参快速繁殖体系[4]。如果与常规育种方法相结合，通过离体培养技术，建立体细胞胚胎发生的无性繁殖系，在细胞和组织水平上进行抗病等抗性育种，就可以缩短育种年限，加快育种进程[5]。 目前研究发现，西洋参胚状体的诱导发生主要存在两种方式：①直接在外植体上发生；②先产生愈伤组织，愈伤组织再分化形成。西洋参组织在离体培养的条件上也可直接发生胚状体，但相关报道较少。关于西洋参愈伤组织诱导出胚状体的报导很多，西洋参的种胚、根髓、成熟根、叶片、子叶、上胚轴，胚轴来源的愈伤组织均能诱导出胚状体。Wang[6]用西洋参根外植体在附加2,4-D 2mg/L 和KT 1mg/L 的培养基上，诱导形成胚性愈伤组织。Tirajoh [7]以西洋参三种外植体 根、上胚轴 研究附加不同生长调节物的MS培养基上体细胞胚胎的发生。体细胞胚胎形成平均为：根 15.6％ 3个月后 ，上胚轴 2％ 6个月后 ，由于这些胚萌发形成茎但没有形成根，因此未能形成完整植株。Zhou等[8]建立了西洋参有效的离体生产方法；对子叶外植体用1.0M蔗糖4℃下进行预处理，改善胚的质量，结合诱导培养基中高蔗糖含量 7% ，胚胎发生的频率由40% 提高75%，而每个外植体胚胎发生数量由10个提高到21个。胚性愈伤组织在含有生长素的培养基上继代培养时，可继续增殖并不断分化出胚状体。在愈伤组织上形成的胚状体，如不及时转移亦可愈伤组织化而再生成胚状体[9]。2,4-D和NAA是诱导西洋参胚状体发生的有效植物生长调节物质，与大多数植物组织培养中要求降低生长素浓度以诱导愈伤组织和胚状体发生的情况一样，西洋参对生长素，特别是2,4-D的浓度有较高要求，不仅诱导愈伤组织需要，而且胚状体发生时也需要[10,11]。 麦草畏 Dicamba 是一种除草剂，其结构和作用类似于2,4-D，其在提高愈伤组织诱导率和胚性愈伤组织诱导率方面具有一定作用[12]。戚家华等 [13]用小麦花药进行离体培养时，在添加1mg/L麦草畏的培养基上，发现诱导愈伤的效果要优于对照CK。并且在促使成苗时形成的苗多为丛苗，表明它促使胚状体形成的能力较强。还发现丛生苗能从根部不断产生新