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FISH预处理及杂交步骤
【玻片预处理】
老化玻片。室温放置过夜或56℃烤片至少30分钟。玻片放入片盒中，室温干燥保存。建议不要将制好的片子放置太久，否则会影响信号的质量。通常情况下，片子老化后马上进行检测。
（玻片老化时间或温度不足会导致实验操作中出现严重细胞脱落现象）
2×SSC、70%乙醇、85％乙醇、100％乙醇。
（1）将玻片置于37℃2×SSC溶液中浸泡30分钟。
（2）室温下70%乙醇、85％乙醇和100％乙醇中各2分钟脱水。自然干燥玻片。
（3）玻片加热至56℃。
（4）按照FISH操作步骤进行FISH实验。
2. 杂交仪变性杂交（自动操作）
（1）探针配制。室温下将如下液体加入到微量离心管中。
名称 体积（μl） 杂交缓冲液 7 去离子水 1 探针 2 ∑ 10.0 （2）离心1-3秒涡旋混匀后再次短暂离心。
将10μl 探针混合物滴于玻片杂交区域，立即加盖盖玻片，用橡皮胶封边
（该步骤必须避免盖玻片与玻片之间产生气泡
（4）准备杂交仪器，共变性条件：85℃，5分钟，杂交条件：42℃，16小时。
特别说明：42℃恒温孵箱中过夜杂交。
注意：将浸湿的置于密封容器中，制备湿盒。
【玻片洗涤
1. 快速洗涤方案：
（1）试剂：
0.3%NP-40/0.4 × SSC，0.1% NP-40/2×SSC ，70％乙醇。
（2）洗涤程序：
注意：使用前将0.3%NP-40/2 × SSC置于67℃水浴箱中至少30分钟，使溶液达到所需温度。
● 移去盖玻片，将玻片置于0.3% NP-40/0.4×SSC溶液中，振荡1-3秒，漂洗2分钟；
特别说明：快速洗涤方案中0.3% NP-40/0.4×SSC洗涤液的温度和时间需要根据样本差异进行调节，
67℃是推荐使用温度。
● 室温下将玻片置于0.1% NP-40/2×SSC中，振荡1-3秒，漂洗30秒；
● 室温下将玻片置于70％乙醇中，漂洗3分钟。
【复染】
暗处自然干燥玻片。
将15μl DAPI复染剂滴加于杂交区域位置，立即盖上盖玻片。暗处放置10-20分钟后，在荧光显微镜下选用合适的滤光片组观察玻片。
完成杂交的玻片置于-20℃避光储存。为了长期保存还可以用中性树胶将加盖的盖玻片四周密封，防止反复观察移动盖片。
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