3 DNA重组.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * Donor recipient * * * * * * * * Target gaps * * * * * * * * holliday * * * * * * * * * * * * * * The left picture shows the binding of dsDNA (red and blue). The right picture shows that one of the strands in dsDNA is displaced, and the ssDNA binds to the non-displaced strand. * The formation of the dimer in this way positions the active sites so they can cut the * * * * * * * * * * * ④细胞中存在平衡转座过程的途径，避免转座频率过高对细胞的影响。 ⑤转座基因插入时，大多数受体基因被钝化；但也有被活化的基因；转座子有自己的启动子，在转录转座酶时，其它相邻基因可被转录。 * * * * * * * * * * * * * * Chromatid centromere chiasma homologous pair * * * * * RecA:是大肠杆菌中recA基因座的产物，具有双重功能，能激活蛋白酶并能改变单链DNA分子。蛋白酶-激活活性控制SOS 反应；核酸酶活性涉及重组修复途径。 * * * * * * * * * * * Vertical horizontal heteroduplex recombinant * gag编码核心蛋白，pol编码逆转录酶和整合酶，env编码外壳蛋白 gag基因：编码前体蛋白,编码55kD的GAG蛋白p55; pol基因：编码反转录酶PoL蛋白，被切割为蛋白酶（p11） 反转录酶（p51）、整合酶等； env基因：编码160kD糖基化蛋白； tax：编码反式激活蛋白; rex: 编码的蛋白，与细胞表达密切相关 病毒的RNA在末端有同向重复序列(Direct repeat)，紧挨5’端的是80~100nt的U5区。在3’端前是170~1350nt的U3区。DR片段在将RNA逆转录为DNA时被用来产生大量的同向重复序列，这些重复序列能在线形DNA找到，在整合的形式DNA中两端各缺少2bp，是由整合的机制造成的。 整合原病毒的形式是线形DNA，DNA两端序列都是“U3-R-U5”，称为LTR（long terminal repeat，长的末端重复序列）。 并且，U5的3′端和U3的5′端由一个短的IR组成，因此LTR本身的两个末端都有反向重复序列。 整合的原病毒DNA与转座子(Transposon)类似，原病毒末端有短反向重复序列，其两端有靶DNA的正向重复序列。 原病毒是有直接将其线形DNA序列插入靶位点产生。与转座子情况类似，病毒DNA的末端很重要，末端突变能阻止其整合。 最保守的特点是紧靠反向重复处存在二核苷酸CA。整合酶把线形DNA末端与一个核糖核蛋白质复合物结合，并切除保守CA以后的碱基，把平末端转变成凹末端。 靶位点是随机在序列上选择的，整合酶在靶位点上交错切口，靶DNA被切除的5’端和病毒DNA的3’凹陷末端共价连接。病毒DNA一条链的两个末端先被连到靶DNA上，随后单链区被宿主的酶所修复。 3′端缺失2个碱基被去除 在此过程中，病毒DNA 5’端的两个突出碱基被去除。结果使被整合的病毒DNA在每个LTR序列上丢失两个碱基，这就是5’U3左端和3’U5右端丢失2bp的机制。 在被整合的逆转录病毒基因组每个末端都存在一个靶DNA的特征短同向重复序列。 每个LTR的U3区携带一个启动子。左边LTR的启动子负责起始转录原病毒。启动子实际上是由RNA到双链DNA转化所形成的。 3.4.6.2 酵母的Ty元件 Ty（transponson yeast，酵母转座子）是由分散的DNA重复序列家族组成，在不同品系的酵母中它们所处的位点不同。 转座后在插入的Ty两端靶基因产生5bp正向重复。Ty的转座效率为10-7～10-8，低于细菌转座子。 在不同Ty元件之间有很大的不同。大部分元件属于两个大家族。被称为Ty1和Ty917。 每个元件长6.3kb，其末端是330bp同向重复序列，称为δ。各种类型中的每个Ty元件都有一定的差异，包括碱基对的替代、插入和缺失。在一个典型的酵母基因组中有约30个拷贝的Ty1型和约6个Ty917型元件。另外还有约100个独立的δ元件，称为单独δs。 Ty元件可被转录成2种带有