细胞培养基本知识基本技术解析.pptVIP

传代步骤（贴壁细胞）： 1. 镜下观察细胞生长至融合状态 2. 吸出旧的培养液，用无血清培养液或PBS清洗两次（切记要清洗干净）。 3. 消化细胞：最常用的方法是在培养瓶中添加1ml 0.25%含EDTA的胰酶，培养箱中37°消化5-15s。可根据不同的细胞类型调整消化时间及程度。 在电镜下观察，当细胞突起回缩，细胞之间间隙增大，细胞近乎缩成圆形即可。 4. 终止消化：立即加入含有血清的培养基，用吸管吹打分散细胞，吹打动作不可过猛，力度要适中，否则容易损伤细胞并产生能伤害细胞的气泡。 5. 1000rmp离心5min，弃上清。 6. 用培养液重悬细胞，计数并调整细胞密度。 3、培养细胞生长状况的观察 常规观察： 培养液颜色（是否变黄） 生长增殖变化（经历到哪个时期，长满否） 形态变化（透明度、折光性、细胞轮廓） 微生物污染（细菌、霉菌） 可用显微镜观察活细胞及其动态 细胞生长状况的观察 细胞计数：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 1.?将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。? 2.?将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3.?计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：??细胞数/mL