RNA提取准备工及注意事项.docVIP

一、枪头和EP管等的消毒灭菌 1、用去离子水配制0.1%的DEPC剧毒物，须在通风橱中小心使用，避光; DEPC水是用DEPC diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯 处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。经检测不含 RNase、DNase和proteinase。 2、将枪头和EP管放入0.1%的DEPC内，保证枪头和EP管内都充满0.1%的DEP避光、静置、过夜4、装枪头和EP管的盒子不需要用DEPC浸泡，将枪头或者EP管内的DEPC水大致去除干后，装起，包好 5、121摄氏度，30min 6、180摄氏度，干燥数个钟头（）注意：处理DEPC时需要戴乳胶手套、口罩！ 4、样品的破碎及匀浆 – 影响降解和得率的因素 样品的破碎是为了彻底匀浆，匀浆是为了使 RNA 彻底完整地释放出来。细胞无须破碎即可直接匀浆，组织需要破碎后才能匀浆，酵母菌和细菌需要先用相应的酶破壁后才能匀浆。内源酶含量较低并且较容易匀浆的组织可以在裂解液中通过匀浆器一次完成破碎和匀浆过程；植物组织，肝脏，胸腺，胰腺，脾脏，脑，脂肪，肌肉组织等样品，它们不是内源酶含量高，就是不容易匀浆，所以必须将组织的破碎和匀浆分开操作。最可靠而且得率最高的破碎方法是使用液氮的碾磨，最可靠的匀浆方法是使用电动匀浆器。使用液氮碾磨要特别注意一点：在整个碾磨过程中，样品不得融化，因为冷冻后内源酶更容易起作用。 5、裂解液