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LipoFiterTM 产品编号 产品名称 规格 HB-TRLF-200 LipoFiterTM脂质体转染试剂 200ul HB-TRLF-1000 1ml HB-TRLF-5000 5ml 保存条件：4℃保存，一年有效。 -20℃保存，三至五年有效,反复冻融不影响产品质量。 LipoFiterTM简介 ? LipoFiterTM脂质体转染试剂( LipoFiterTM Liposomal Transfection Reagent )是一种适合于把质粒或其它形式的核酸,以及核酸蛋白复合物转染到培养的真核细胞中的高效阳离子脂质体转染试剂。 LipoFiterTM优点 1、转染效率高，重复性好，操作简单。 2、无明显细胞毒性，用LipoFiterTM转染细胞后，对于大多数细胞，72小时内不更换培养液无明显细胞毒性。 3、LipoFiterTM对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用，并且可以用于稳定表达细胞株的筛选。 ? LipoFiterTM使用说明 细胞培养：以六孔板为例，在转染前一天(20-24小时)把约0.4×106 细胞(具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定)培养到六孔板内，使第二天细胞汇合度（confluent）能达到约50%~70%。 注1：汉恒生物LipoFiterTM对细胞毒性极小，因此无需通过增大细胞汇合度来抵抗转染试剂毒性，我们实验证明，50%~70% confluent时细胞的转染效率可以达到最优。 注2：其它培养板或培养皿参考六孔板进行操作，各种培养介质如培养板，培养皿的详细细胞接种数目推荐《各种培养介质下LipoFiterTM转染前细胞接种数量级详表》。 在进行下述转染步骤前，把六孔板每孔内换成无血清的细胞培养液。培养液的体积约为2ml。 注：其他培养介质培养液体积参见《各种培养介质下LipoFiterTM转染DNA详表》，抗生素、Glutamine等对LipoFiterTM转染并无影响。我们实验证实，不同来源的血清对LipoFiter转染有不同的影响，所以转染的时候建议无血清转染，转染换液时再换回有血清培养基。 3. 把LipoFiterTM脂质体转染试剂轻轻混匀。 4.对于待转染的六孔板中一个孔的细胞，取一只洁净无菌离心管，加入4μg质粒DNA（其他培养介质DNA用量参见附表）及适量DMEM溶液，用枪轻轻吹打混匀,终体积250μl 注：其他培养介质培养液体积参见《各种培养介质下LipoFiterTM转染DNA详表》，如后续实验需要，可将DMEM用其他如1640、MEM、F12等培养基代替，对LipoFiterTM转染效率及操作并无影响。 5. 取另一只洁净无菌离心管，加入238μl DMEM溶液，再加入12μl LipoFiterTM（其他培养介质LipoFiterTM用量参见附表），用枪轻轻吹打混匀,终体积250μl，室温放置5分钟。 6. 将步骤4与5中的DNA溶液与LipoFiterTM溶液混合，用枪轻轻吹打混匀。注意：不可Vortex或离心。 7. 室温孵育20分钟。有可能出现絮状沉淀物，属正常现象，不会影响转染效率。 8. 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，均把500μl LipoFiterTM-DNA混合物全部加入六孔板的一个孔内。加入时注意尽量均匀加入到整个孔内，随后轻轻8字摇摆混匀。 注：针对贴壁细胞，如上述所说，只需将LipoFiterTM-DNA复合物加入细胞中孵育6小时再换液即可。若是转染悬浮或半悬浮细胞，则推荐通过平角离心转染法，即将适量的LipoFiterTM-DNA复合物加入细胞培养皿后（步骤8），封口膜封好，放入平角离心机，低速（500g-1000g/min）离心1.5h，然后放入培养箱中正常培养6小时再换液即可。 9. 细胞培养箱内培养6小时后，去除含有LipoFiterTM-DNA的无血清培养液。每孔加入2ml新鲜含血清的细胞培养液继续培养。 注：通常LipoFiterTM-DNA混合物和细胞一起孵育6小时已经足够产生较高的转染效率。大多数细胞和LipoFiterTM-DNA一起培养长达72小时未见明显细胞毒性。但转染后6小时更换新鲜培养液对于一些生长非常快速的细胞有助于提高转染效率。对一些比较易于转染的细胞如HEK293T细胞，换液可视细胞生长状况而定，无需为提高转染效率而换液。 10. 转染后续处理 1) 对于基因表达，再培养24-40小时后即可检测转染效果，如转染带GFP或者其他荧光基因的表达载体，可用荧光显微镜观测细胞转染效率。 2) 用于筛选稳定表达细胞株，则在转染后24小时即可加入适当的筛选药物，例如G418或Puromycin（嘌呤霉素）等，进行稳定表达细胞株的筛选。 注1：对于六孔板中一个孔的细胞，DNA用量可以在1.6～