断血流皂苷A分散片溶出度的方法学研究.docVIP

断血流皂苷A分散片溶出度的方法学研究 [摘 要]目的证明断血流皂苷A分散片溶出度的检测方法的可行性。方法通过高效液相色谱法色谱法，检测峰面积值，用外标法计算含量。结果本法阴性无干扰，浓度与峰面积值线性关系良好，r 0.9997，方法平均回收率为98.82%，精密度良好。结论本方法能快速、准确地测定断血流皂苷A分散片的溶出度。 [关键词]断血流皂苷A分散片溶出度高效液相色谱法 中图分类号：TG333.7 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）08-0316-01 断血流皂苷A分散片是传统止血良药断血流中提取而制得的单体活性成分制剂，主要用于妇科止血。按照中国药典2010年版[1]及文献的相关要求[2]，本文对断血流皂苷A分散片的溶出度方法进行了验证，以更好地控制产品质量。 1 仪器、试药、测定方法 仪器：RCZ―8A药物溶出度仪（天津大学无线电厂）、AgilentTechnologies1260Infinity高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）、CPA225D电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司） 试药：醉鱼草皂苷IVb（断血流皂苷A）为中国食品药品生检定研究院提供，批号：110782-200602、甲醇均为色谱纯试剂（美国天地），其余试剂为分析纯。 测定方法：取本品，照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录XC第二法），以水500ml为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，经10分钟时，取溶液15ml，用0.8um滤膜滤过，精密量取续滤液6.3ml，蒸干，加75%乙醇溶解并定容成5ml，制成每1ml中含断血流皂苷A约25ug的溶液，作为供试品溶液，照下述高效液相色谱条件，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取断血流皂苷A对照品2.5mg，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含断血流皂苷A25ug）的溶液，作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算溶出度，即得。限度规定为标示量的80%。 高效液相色谱条件：色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（65：35）为流动相；检测波长为250nm，理论板数按断血流皂苷A峰计算应不得低于3000。 2 试验与结果 2.1干扰试验 按照断血流皂苷A分散片的处方，取本品的辅料，按照上述供试品溶液的制备方法，制成阴性供试品溶液。精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；阴性供试品在断血流皂苷A色谱峰位置处无相应峰出现，表明阴性无干扰。 2.2线性范围的考察 精密称取断血流皂苷A对照品2.5mg，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，使成0.25mg/ml。精密吸取上述溶液0.25、0.5、1、2ml、4ml分别置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，分别成6.25、12.5、25、50、100ug/ml。精密吸取上述各种溶液20？l注入液相色谱仪，按色谱条件测得峰面积，结果见表1。并以峰面积（）对进样浓度（）进行回归，得标准曲线方程：Y 34538X+386，r 0.9997。结果表明断血流皂苷A在6.25ug/ml～100ug/ml范围内，断血流皂苷A峰面积值与样品浓度有良好线性关系。 2.3回收率试验 取断血流皂苷A6mg、8mg、10mg（断血流皂苷A的量相当于处方量的60%、80%、100%），加相应处方量的空白辅料，混合均匀，置500ml量瓶中，加水适量，超声约10分钟，冷至室温，用水稀释至刻度，摇匀，用0.8um的滤膜过滤，取续滤液6.3ml，蒸干，用75%乙醇溶解并定容成5ml，作为供试品溶液，平行制备三份。另取断血流皂苷A对照品2.5mg，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释刻至度，摇匀，再取1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释刻至度，摇匀，即得（每1ml中含断血流皂苷A25ug），作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID），分别取20ul进样，计算回收率，结果见表1。 以上9组平均回收率为98.82%，RSD 1.0%。结果显示，本方法回收率较好。 2.4 稳定性试验 取溶出测定项下溶液，放置2、4、6、8、10小时后，照高效液相色谱法，测定峰面积，结果各时间段的峰面积均值为757484.5，相对标准偏差为0.53%，说明该被测溶液放置10小时较为稳定。 2.5 精密度试验 取溶出度测定项下的断血流皂苷A对照品溶液，照高效液相色谱法，连续进样5针，记录峰面积，结果5针的峰面积均值为851753.4，相对标准偏差为0.48%，说明该方法精密度良好。 2.6 溶出曲线 取本品，照溶出度测定法，分别在3、5、10、15、25、35、45、60分钟时取样，制成供试品溶液。照高效液相法进行溶