土壤中尿素细菌的分离汇编.pptVIP

2、显微镜直接计数 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。 * 专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课题背景 CO(NH2)2 尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 CO(NH2) 脲酶 + CO2 NH3 + H2O 一、尿素细菌的分离 15.0 琼脂 1.0 尿素 10.0 葡萄糖 0.2 MgSO4·7H2O 2.1 NaH2PO4 1.4 KH2PO4 含量（g/L） 成分 碳源： 葡萄糖、尿素 氮源： 尿素 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 该培养基以尿素为唯一氮源，只有能分解尿素的 细菌才能生长，其他细菌因缺乏氮源而不能生长 二、尿素细菌的计数： 1.间接计数法（活菌计数法） 常用方法：稀释涂布平板法 原理： 1个菌落→1个活菌 计算： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积(ml) M：稀释倍数 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） ？ 乙：A组结果误差过大，意味着操作有误， 不应用于计算平均值,需要重新实验 （3）注意事项 ①选30～300个菌落的平板统计 ②每个稀释度取3个平板取其平均值——重复实验 ③统计结果表示：每克样品中的菌落数 ④菌落数 ＜ 活菌的实际数 分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 ①测细菌数：一般用104、105、106倍稀释液 ②测放线菌：一般用103、104、105倍稀释液 ③测真菌数：一般用102、103、104倍稀释液 利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B同学分别得到以下两种统计结果。 1、A同学筛选出150个菌落。 2、B同学筛选出50个菌落。 B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。 请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证据。 同等条件下设置对照 ？ 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 设置对照—同等条件下，培养空白培养基 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 缺点 不能区分死菌与活菌 二 实验过程 1.取土样 2.制备土壤液 3.系列稀释 4.涂布平板、培养 5.观察、统计 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 四.课外延伸 鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培养基：加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物。 酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征 *