实验六产淀粉酶细菌的分离筛选汇编.ppt

实验六 产淀粉酶细菌的分离筛选 掌握分离筛选产生淀粉酶细菌的方法 学习酶活分析 实 验 目 的 样品：新鲜土壤样品（同学自备）。 培养基：淀粉培养基。 无菌水：带有玻璃珠装有18mL无菌水三角瓶。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌离心管、电子天平、记号笔、玻璃涂棒、酒精灯、火柴。 实 验 材 料 制备土壤稀释液： 称取土壤2g，放入18mL带有玻璃珠的无菌水三角瓶中，振荡5min，即为稀释10-1的土壤悬液。然后在离心管中依次稀释至10-3、10-4 稀释度。 制备淀粉培养基平板 每组制5块牛膏蛋胨培养基平板 具体制法为：倒入融化好的牛膏蛋胨培养基约15 ml后（温度为不烫手为宜），置于桌面冷却为固体平板。在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 实 验 步 骤 吸取稀释液无菌操作法分别吸取10-3、10-4 土壤稀释液0.1mL，分别加在已制好的2块淀粉平板培养基上。 涂板用涂布棒将稀释液在培养基上充分混匀铺平，静置5min 划线分离将10-1土壤稀释液用接种环挑取一环，每人在一块淀粉培养基上进行划线分离。然后倒置于恒温箱培养。看演示 培养倒置于房间37℃恒温箱培养24小时。 24小时后 定时间），在之前稀释涂布和划线的3块淀粉培养基上选取典型细菌菌落（尽量选取边缘整齐和规则的菌落），测量其菌落半径（C值）并用记号笔进行编号、记录。 然后将编号后的菌落用无菌牙签挑取，在备用的1块淀粉培养基平板上分别点种。演示 1 2 3 1 2 观察水解圈的产生，并测量其半径 加入碘液到长有菌落的3块淀粉培养基上，观察是否有水解圈的产生，并测量其半径（H值） 。 对照备用点种平板和编号菌落的水解圈大小，挑取水解圈最大的一个菌斑（计算H/C），用记号笔将其勾选出来。 将点种平板继续置于30℃培养。 实验纪录： 拍照纪录筛选培养基平板上的水解圈。 列表纪录单菌落数量、无水解圈菌落数量有水解圈菌落数量及若干个菌落水解圈大小及菌落半径。