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盐酸左氧氟沙星注射液无菌检查方法验证 　　摘要：目的确认盐酸左氧氟沙星注射液在所用的试验条件下无抑菌活性并确保测定方法的可靠性。方法薄膜过滤法。结果阳性对照管生长良好，阴性对照管无菌生长，与对照管比较，试验组各管中各生长菌均生长良好，说明样品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用。结论盐酸左氧氟沙星注射液的无菌检查，可采用薄膜过滤法，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，冲洗量900mL，每次100mL。 　　关键词：盐酸左氧氟沙星；薄膜过滤法；无菌检查；验证 　　1 样品与试验仪器 　　1.1样品：盐酸左氧氟沙星注射液（河北长天药业有限公司，规格2ml：0.1g） 　　1.2试验仪器：见表1 　　表1 试验仪器 　　2 菌种与培养基 　　2.1菌种：均由中国药品生物制品检定所提供 　　大肠埃希菌[CMCC（B）44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]、生孢梭菌[CMCC（B）64941]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003] 　　2.2培养基：均由北京三药科技开发公司提供 　　硫乙醇酸盐流体培养基：100419 改良马丁培养基：100512 　　营养肉汤培养基：101215 改良马丁琼脂培养基：101028 　　营养琼脂培养基：100610 玫瑰红钠琼脂培养基：091118 　　3 试验方法 　　3.1菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上。 　　3.1.1分别取经33℃培养24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌的营养肉汤培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液，逐管10倍量逐级稀释至1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。 　　3.1.2取经25℃培养24小时白色念珠菌的改良马丁培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍量逐级稀释至含菌数小于100cfu的菌悬液。 　　3.1.3取经25℃培养7天的黑曲霉的改良马丁琼脂斜面培养物，加5ml 含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液洗脱孢子，吸出孢子悬液至无菌试管中，取此孢子液1 ml，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍量逐级稀释至含菌数小于100cfu的菌悬液。 　　3.2菌悬液菌落计数 　　取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌适宜稀释度的菌悬液各1ml，分别注入培养皿中，立即倾注20ml温度不超过45℃ 的营养琼脂培养基，凝固后倒置平皿，33℃，72小时培养后计数。取生孢梭菌适宜稀释度的菌悬液1ml注入100ml硫乙醇酸盐流体培养基的厌氧层33℃，72小时培养后计数。取白色念珠菌菌悬液，黑曲霉菌悬液各 1ml，分别注入培养皿中，立即倾注20ml温度不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基，25℃，120小时培养后计数。培养结果见表2。 　　3.3培养基灵敏度实验 　　培养基无菌性检查 每批培养基随机取配制及灭菌的培养基各5支，培养14天，结果见表3。 　　表2 菌悬液菌落计数结果 　　表3 无菌性检查结果 　　取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另一支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另一支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果见表4。空白对照管无菌生长，加菌的培养基管均生长良好，判断该培养基的灵敏度检查符合规定。 　　表4 培养基灵敏度实验检查结果 　　3.4检验方法 　　取供试品30支，用无菌检测系统（HTY--ⅢA型集菌仪）和一次性全封闭集菌培养器（KDGB330）全量过滤，过滤后用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每次每筒100ml，共冲洗3次，总量共计900ml。向两个筒中加入硫乙醇酸盐流体培养基各100ml，并向其中一个硫乙醇酸盐流体培养基筒中加入小于100cfu金黄色葡萄球菌菌悬液1ml作为阳性对照；另一筒加入改良马丁培养基100ml。细菌33℃、霉菌25℃培养14天，逐日观察并记录。 　　阴性对照：将PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液过滤，冲洗方法同样品检验，培养，逐日观察并记录。 　　3.5验证方法 　　试验组：取供试品60支，每10支加入一个滤筒，