质谱修改稿.pptVIP

质谱法的原理及应用 质谱，虽然它的名字叫“质谱”，但它能做的事一点也不“质朴”。 质谱是四大波谱之一 四大波谱：红外/拉曼光谱（IR/Raman）、紫外（UV）、质谱（MS）、核磁共振（NMR） 内容 世界上第一台质谱仪出现于1912年（ Joseph John Thomson ）。 早期质谱仪器:测定原子质量、同位素的相对丰度、研究电子碰撞过程。 二次世界大战时期，质谱法在化学分析中受到重视。 20世纪60年代末，色谱—质谱联用技术出现。 80年代左右，随着快原子轰击（FAB）、电喷雾（ESI）和基质辅助激光解析（MALDI）等新“软电离”技术的出现，质谱能用于分析高极性、难挥发和热不稳定样品后，生物质谱飞速发展，已成为现代科学前沿的热点之一。 离子源 离子源是质谱仪的核心，所选离子源的类型将直 接决定质谱图的信息。 电子轰击电离（EI） 化学电离（CI） 场电离（FI）和场解吸 （ FD ） 快原子轰击（FAB） 基质辅助激光解吸电离（MALDI） 电喷雾电离（ESI） 大气压化学电离（APCI） 大气压光离子电离（APPI） 电感耦合等离子体离子源（ICP） 电子轰击电离源（EI） 一般分子中共价键的电离能约为10eV，EI源一般采用70eV的电子进行轰击（所有的标准质谱图都是在70ev下做出的）。在70ev电子碰撞作用下，有机物分子可能被打掉一个电子形成分子离子，也可能会发生化学键的断裂形成碎片离子。 EI源特点：能提供有机化合物最丰富的结构信息，有较好的重现性，其裂解规律的研究也最完善，已建立了数万种化合物的标准图谱库供检索。但不适用于难挥发和热稳定性差的供试品的离子化。 化学电离源（CI） CI源特点：准分子离子峰强度大，便于利用该峰准确推断分子量。重现性差，碎片离子少，样品结构信息少。CI源也不适用于难挥发和热稳定性差的供试品的离子化 场电离（FI）和场解吸 （ FD ） 场离子化（FI）是一种温和的电离技术，产生的碎片很少，主要得到的是分子离子和（M+1）离子。场电离要求样品分子处于气态，灵敏度又低，因而应用逐渐减少。 场解吸（FD）的原理与场电离相同，但样品是被沉积在电极上。为增加离子的产率，电极上有很多微针。在电场的作用下（或再辅以温和地加热），样品分子不经汽化直接得到准分子离子，因而场解吸适合于难汽化的、热不稳定的样品，如肽类化合物、糖、高聚物、有机酸的盐、有机金属化合物等。 由场解吸所得到的质谱中准分子离子峰强，碎片离子很少。 快原子轰击（FAB） FAB电离过程中不必加热气化，因此适合于分析大分子量、难气化、热稳定性差的样品。例如肽类、低聚糖、天然抗生素、有机金属络合物等。FAB源得到的质谱不仅有较强的准分子离子峰，而且有较丰富的结构信息。但是，它与EI源得到的质谱图很不相同。其一是它的分子量信息不是分子离子峰M，而往往是 M+H +或 M+Na +等准分子离子峰；其二是碎片峰比EI谱要少。 FAB与MALDI都需要基质的辅助，FAB常用的基质有甘油，硫代甘油，3-硝基苄醇，三乙醇胺等。 基质辅助激光解吸电离（MALDI） MALDI属于软电离技术，它比较适合于分析生物大分子，如肽、蛋白质、核酸等。得到的质谱主要是分子离子，准分子离子（M+H+、M+Na+、M+K+）。碎片离子和多电荷离子较少。 优点： 测定生物大分子分子量 特别适合于与TOF相配，也可与离子阱型质量分析器相配 缺点： 碎片离子少，能提供的结构信息少 。 要求样品溶于基质 。 电喷雾电离（ESI） 电喷雾电离源是一种软电离方式，即便是分子量大，稳定性差的化合物，也不会在电离过程中发生分解，它适合于分析极性强的大分子有机化合物，如蛋白质、肽、糖等。 电喷雾电离源的最大特点是容易形成多电荷离子。这样，一个分子量为10000Da的分子若带有10个电荷，则其质荷比只有1000Da，进入了一般质谱仪可以分析的范围之内。根据这一特点，目前采用电喷雾电离，可以测量分子量300000 Da以上的蛋白质。 在电喷雾电离源中加到喷嘴上的电压可以是正，也可以是负，通过调节极性，可以得到正或负离子的质谱。由于样品分子要溶于溶剂中，通常带上质子、碱金属离子或铵离子；当用负喷雾电场时，通过除去质子或其它阳离子而生成准负离子。 ESI-MS ESI-MS在一定的电压下不会使样品分子产生碎片，因此对于小分子的样品ESI谱图可确定样品的组成成份有几种。但对于大分子的蛋白质来说由于要形成非常复杂的多电荷峰，因此分析大分子混合物较为困难，一般只用于分析较纯的大分子化合物。 另外它还可与HPLC分离方法相连接,扩大了质谱在生物领域的应用。 用户的样品准备： 样品可为冻干粉或溶液，如有毒性或腐蚀性或需特殊保存的样品，请事先声明。 冻干粉：冻干粉要经过脱