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基因工程 第一章、绪论 1、名词解释 基因：一段可以编码具有某种生物学功能物质的核苷酸序列。 移动基因：又称为转位因子，由于它可以从染色体基因组上的一个位置转移到另一个位置，甚至在不同的染色体之间跃迁，因此又叫做跳跃基因。它又分为插入序列、转位子、逆转座子。 断裂基因：是指编码序列不连续的间断基因，最初在腺病毒中发现。 假基因：类似于基因但不表达的DNA序列。不表现任何功能，是基因的退化形式。 管家基因和奢侈基因：具有相同遗传信息的同一个体细胞间其所利用的基因并不相同，有的基因活动是维持细胞基本代谢所必须的，而有的基因则在一些分化细胞中活动，这正是细胞分化、生物发育的基础。前者称为管家基因，而后者被称为奢侈基因。 基因工程：也叫基因操作、遗传工程、重组体DNA技术。指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子， 构成遗传物质的新组合，并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞中内，而能持续稳定的繁殖。 克隆：是指一个祖先通过无性繁殖方式产生的后代，或具有相同遗传性状的DNA分子、细胞或个体所组成的特 殊的生命群体。 2、重复基因 不重复的唯一序列（只有一个拷贝）：包括大多数编码蛋白质的结构基因和基因间间隔序列 低度重复序列（＜10个拷贝） 中度重复序列（10到几百个拷贝） 特点：⑴、重复单位序列相似，但不完全一样 ⑵、散在分布于基因组中 ⑶、序列的长度和拷贝数非常不均一 ⑷、中度重复序列一般具有种属特异性，可作为DNA标记 高度重复序列（几百个拷贝到几百万个拷贝）：卫星DNA(Satellite?DNA) 3、重叠基因或嵌套基因类型 一个基因的核苷酸序列完全包含在另一个核苷酸序列中。由于它们的读码结构互不相同，因此编码着不同的蛋白质。 2个基因的核苷酸序列之末端密码子相互重叠。 4、基因的特点 ⑴、不同基因具有相同的物质基础 ⑵、基因是可以切割的 ⑶、基因是可以转移的 ⑷、多肽与基因之间存在对应关系 ⑸、遗传密码是通用的 ⑹、基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代 5、生物技术可以分为传统生物技术，工业生物发酵技术和现代生物技术 现代生物技术包括基因工程、蛋白质工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等五大工程技术 6、基因工程的特点及优点 特点：分子水平上的操作，细胞水平上的表达。 优点：打破了常规育种难以突破的物种界限，可以使原核生物与真核生物之间、动物与植物之间、甚至人与其他生物之间的遗传信息进行重组和转移。 7、基因工程诞生的技术基础 ⑴、DNA分子的体外切割和连接技术 ⑵、质粒作为基因工程载体 ⑶、大肠杆菌转化体系的建立 ⑷、琼脂糖凝胶电泳和Southern转移杂交技术 8、基因工程研究的步骤（基本技术路线） ⑴、从复杂的生物体基因组中，经酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片段。 ⑵、在体外，将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制并具有选择性标记的载体分子上，形成重组DNA分子。 ⑶、将重组DNA分子转移到适当的受体细胞，并与之一起增殖。 ⑷、从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的受体细胞克隆。 ⑸、从筛选出的受体细胞克隆，提取出已经得到扩增的目的基因，供进一步分析研究之用。 ⑹、将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。 9、基因工程研究的主要内容 ⑴、基础研究 ①、基因工程克隆载体的研究 ②、基因工程受体系统的研究 ③、目的基因的研究 ④、基因工程工具酶的研究 ⑤、基因工程新技术研究 ⑵、应用研究 ①、基因工程药物研究 ②、用于提高奶酪产量 ③、基因治疗研究 ④、转基因动植物 ⑤、其他方面的应用 10、实验室的物理安全分4级：P1～P4级。实验室的生物安全分3 级（大肠杆菌）：EK1～EK3级 第二章、基因工程操作的主要技术原理 1、名称解释 PCR技术：聚合酶链式反应，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故称基因的体外扩增法。 核酸的分子杂交：将带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA混合在一起，其相应的同源区段就会退火形成双链结构的技术称为核酸的分子杂交。如果退火的核酸来自不同的生物有机体，所形成的双链分子就被称为杂种核酸分子。 印渍技术：指将存在于凝胶中的生物大分子转移（印渍）到固定化介质并加以检测分析的技术，目前广泛应用于DNA、RNA、和蛋白质的检测 。 探针：一小段用同位素、生物素或荧光染料标标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 原位杂交：也叫菌落或噬菌斑杂交，指把菌落或噬菌斑转移到硝酸纤维素膜上，使溶