小麦MYB基因的表达分析.docVIP

小麦MYB基因的表达分析 摘要 MYB转录因子在植物生长发育和响应外界环境胁迫中发挥着重要的作用。为了分析小麦MYB基因在小麦不同组织中的表达特性，采用半定量RT-PCR方法研究了小麦MYB基因在根、茎和叶中的表达。结果表明：MYB的转录本在3个组织中均有表达，在根中MYB表达量最高，叶中表达量最低。 关键词 小麦；MYB 基因；表达 中图分类号 S512.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）01-0029-01 干旱、盐碱和极端的温度等非生物胁迫严重影响小麦的分布和产量，提高小麦对非生物胁迫的耐受性已经成为小麦育种的主要目标。利用转基因的方法，将一些优良的抗逆基因转化小麦，是提高小麦抗逆能力的一个主要方法。 MYB转录因子在应答非生物胁迫中具有重要作用，例如TaMyb2-Ⅱ基因受干旱胁迫诱导表达[1-2]。TaMYB32基因受高盐胁迫诱导[3]。在前期克隆小麦MYB基因的基础上[4]，分析在小麦不同组织中MYB基因的表达情况，为进一步研究基因的功能奠定试验基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料 挑选大小均匀的小麦种子30粒，用75%的酒精消毒1 min，用无菌水冲洗后，置于培养皿中，加入去离子水。在光照培养箱中20 ℃培养，生长20 d后，取根、茎和叶片，经液氮速冻后，于-70 ℃保存备用[5]。 1.2 试验方法 用TRIZOL试剂盒（TIANGENG）提取根、茎、叶组织的总RNA。利用AMV反转录酶（TaKaRa）发转录合成cDNA第1链。以分别转录的根、茎和叶组织总RNA为模板进行RT-PCR，RT-PCR反应体系和程序参见于月华等[4]。 采用半定量RT-PCR方法，以小麦的根、茎和叶组织cDNA第一链为模板，检测MYB基因在3种组织中的表达情况。扩增引物为：F：5′-AACGCCGTCAAGAATCACT-3′和R：5′-GAAGAAACCGCCACCACTA-3′。以小麦actin基因为内参基因[1]。扩增体系为20 uL，扩增程序为：94 ℃预变性10 min，94 ℃变性30 s→60 ℃复性45 s→72 ℃延伸1 min，28个循环，72 ℃延伸10 min[6]。 2 结果与分析 利用半定量RT-PCR，分析在小麦根、茎和叶组织中MYB基因的表达特性。结果表明，该基因在上述3种组织中均有表达（图1）。利用Quantity One软件对电泳结果进行定量分析，表达量大小依次为根、茎和叶。 3 结论与讨论 在不同的组织中，小麦MYB基因的表达呈现组织特异性表达和组成型表达2种模式[7]。例如，半定量RT-PCR分析发现TaMYB32基因的转录本在根、茎、叶、雌蕊及花药中均有很强的表达，在上述组织中呈现组成型表达模式[3]。在茎和根组织中，TaMYB4表达量高，但是在叶组织不表达，表达具有一定的组织特异性。 研究结果表明，在小麦根、茎和叶组织中MYB基因的表达量并不相同，在根中表达量最高，在叶片中表达量最低。小麦MYB基因在这些组织中具体参与哪些生理和发育过程仍需进一步研究确定[8-13]。 4 参考文献 [1] 王爱萍，梁素明，宋长水，等.干旱胁迫下小麦TaMyb2-Ⅱ基因的表达水平变化研究[J].山西农业大学学报：自然科学版，2008（3）：255-256. [2] 王爱萍，梁素明，宋长水，等.小麦TaMyb2-Ⅱ基因的克隆[J].山西农业大学学报：自然科学版，2009（2）：104-105. [3] 张立超，赵光耀，贾继增，等.小麦盐胁迫相关基因TaMYB32的克隆与分析[J].作物学报，2009（7）：1181-1187. [4] 于月华，王莉萍，高文伟，等.小麦盐胁迫相关基因的克隆与表达分析[J].西北植物学报，2012，32（6）：1073-1078. [5] 刘丽，徐兆师，张瑞越，等.小麦胁迫相关基因W1的克隆及表达模式分析[J].植物遗传资源学报，2008（4）：423-427. [6] 贾东升，毛新国，景蕊莲，等.小麦转录因子TaMyb2s的克隆及表达[J].作物学报，2008（8）：1323-1329. [7] MA Q H，WANG C，ZHU H H.TaMYB4 cloned from wheat regulates lignin biosynthesis through negatively controlling the transcripts of both cinnamyl alcohol dehydrogenase and cinnamoyl-CoA reductase genes[J].Biochimie，2011，93（7）：1179-1186. [8] 陈荣敏.普通小麦Myb和Dof转录因子家庭基因的克隆和表达研究[D].北京：中国农业大学，2