甘松挥发油的体外抑菌实验研究.docVIP

甘松挥发油的体外抑菌实验研究 摘 要：目的：研究甘松挥发油的体外抑菌活性。方法：以水蒸气蒸馏法对甘松挥发油进行提取，采用滤纸片法对其进行体外抑菌活性实验。结果：甘松挥发油对白色念珠菌和沙门氏杆菌有一定抑菌作用，但对枯草杆菌的抑菌效果不明显。 关键词：甘松；挥发油；抑菌活性甘松 Nardostachys chinensis Batal.系败酱科甘松属植物甘松的干燥根及根茎。甘松属植物全世界仅有3种，我国2种，分别为甘松Nardostachys chinensis Batal.及匙叶甘松N?jatamansi DC[1]。本论文主要对其挥发油进行体外抑菌活性研究，为甘松的进一步开发利用提供依据，现将结果总结如下。 1 实验材料 1.1 药品与试剂 药材：甘松N.chinensis Batal.购自通化市医药公司，经鉴定为败酱科甘松属植物甘松的干燥根及根茎。 菌株：白色念珠菌（Candida albicans）、沙门氏杆菌（Salmonella）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为实验室存留样本。 培养基：成分为牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1000mL。 实验试剂：二甲基亚砜（DMSO）；95%乙醇（长春化学试剂厂）；对照品：水杨酸（购于广州市医药工业研究所）。 1.2 实验仪器 立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-50S11 上海博讯实业有限公司医疗设备厂；FA-1604A电子分析天平 日本岛津公司； KQ-100E型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司； 净化工作台 上海新苗医疗器械有限； ZNHW-Ⅱ型智能恒温电热套 郑州长城科工贸有限公司； SPX-150B-Z型生化培养箱 上海博讯实业有限公司医疗设备厂； 微量定量移液器 上海狄士医疗器械有限公司； 酒精灯；1000mL锥形瓶；培养皿若干；试管若干等。 2 方法与结果 2.1 甘松挥发油提取 采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将甘松粉碎后，用挥发油提取器按常规水蒸气蒸馏法提取挥发油，经无水硫酸钠干燥后得挥发油，淡黄绿色，具有特殊嗅味。 2.2 不同浓度挥发油的配制 用DMSO溶解，配制浓度分别为50%（用微量定量移液器分别取DMSO 5μL和挥发油5μL混匀）、25%（用微量定量移液器分别取DMSO 15μL和挥发油5μL混匀）、20%（用微量定量移液器分别取DMSO 20μL和挥发油5μL混匀）。 2.3 滤纸片的制备 将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片，直径为5.0mm，置于干燥洁净的培养皿内，放入立式压力蒸汽灭菌锅中经121.3℃、20min高压灭菌后，取出放入恒温干燥箱内进行干燥。在无菌操作条件下，取干燥后的纸片一定数量，放入甘挥发油不同浓度溶液中，浸润后备用。 2.4 培养基的制备 用电子天平称取培养基各成分于容量为1000mL的烧杯中，并加蒸馏水1000mL于此烧杯中，将此烧杯放在电炉上加热，并不断搅拌使之完全溶解，1mol?L-1的氢氧化钠溶液调节pH7.0～7.5，将溶解的培养基平均倒入3个1000mL锥形瓶，用报纸包扎好，然后放入立式压力蒸汽灭菌锅中经121.3℃、20min高压灭菌。 2.5 菌株的培养 在无菌操作条件下，用接种环取沙门氏菌菌株一环，用划线法接种在制作好的平板和固体斜面培养基中，然后用不同接种环分别以同样方法对枯草芽孢杆菌、白色念珠菌进行接种。把各菌种植于37℃恒温培养箱中进行培养24h，24h后取出放入4℃环境保存备用。 2.6 体外抑菌实验 分别取上述菌株的新鲜培养物，在无菌操作条件下，用接种环分别取不同的菌种置于三个装有无菌蒸馏水的试管中，制成三种菌悬液，再用微量定量移液器接种菌种于平板培养基上，分别用不同涂布棒均匀涂布接种过不同菌种的平板培养基，再用无菌镊子，将浸润在不同浓度药液中的纸片均匀间隔贴于各平板培养基表面，轻压纸片使之接触良好，放入37℃恒温培养箱中，培养24h后取出，观察抑菌圈大小，测量并记录结果，结果见表1。判定标准：抑菌圈直径小于9mm为低度敏感；9.1～11mm为中度敏感；11.1～15mm为高度敏感。 2.7 结果 三 结论 抑菌试验结果表明：甘松挥发油的抑菌作用弱于对照品水杨酸，对白色念珠菌有明显的抑菌作用，最大抑菌圈的样品浓度为50%，并且对白色念珠菌的抑菌活性随浓度的降低而减弱，而对沙门氏杆菌有一定的抑菌活性，最大抑菌圈的样品浓度为50%，但对枯草芽孢杆菌无明显抑菌效果。 [参考文献] [1]张毅，徐丽珍，杨世林.甘松化学成分的研究[J].中草药，2006，37：181-183. [2]中国药典[S].一部.2010：58. [3]张毅，徐丽珍，杨世林.甘松化学成分的研究（Ⅱ）[J].中草药，2007，38（6）： 823-825.