基因工程常规技术-凝胶电泳剖析.pptVIP

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 用于双链DNA片段的分离纯化、蛋白质电泳 迁移率受碱基组成和序列影响、与蛋白质的结构及荷质比有关 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 用于单链DNA片段的分离或纯化、蛋白质电泳 迁移率与碱基组成及序列完全无关、与蛋白质的结构及荷质比无关 * 垂直板电泳装置 * * SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS） 十二烷基磺酸钠(SDS)和少量巯基乙醇 蛋白质中的多肽链处于伸展状态 形成SDS-蛋白质复合体 具有相同的荷质比 具有相同的构象 蛋白质 电泳速度由质量决定 原理 * 原态蛋白质 磺酸基 极性亲水 烷基 亲油（蛋白质疏水区） * 凝胶染色方案 Ethidium bromide （EB） 核酸染色方案 1. EB染色 溴化乙锭:中等毒性物质 毒性：强诱变剂、致突变性 光敏感性：紫外、可见光 热敏感性：热挥发 * EB是扁平分子，能插入DNA碱基之间，但不与琼脂糖结合。 EB在紫外光照射下能发出红色荧光，EB-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，因此可显示DNA泳带在凝胶中所处的位置。 荧光强度与DNA含量成正比。 * 在EB存在的情况下，线状DNA的电泳迁移率约降低15%。当需要知道核酸片段准确大小时，应在无EB情况下电泳，结束后EB染色。 * EB替代物 Goldview：宣称无毒、不灵敏、影响回收、荧光易淬