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纳米抗体的性质及其应用 　　摘要：骆驼体内存在着天然缺失轻链的重链抗体，克隆其可变区得到的单域抗体是最小的功能性抗原结合片段，相对分子质量为15kD，称为纳米抗体。纳米抗体具有容易表达、稳定性强、可溶性好等优点。这种小型抗体在基础研究、新药开发和疾病诊断与治疗上具有广阔的应用前景。本文主要针对纳米抗体的性质与应用进行阐述。 　　关键词：重链抗体；纳米抗体；疾病诊断；疾病治疗 　　Properties and application of single domain antibody fragments 　　GU Kai1，ZHANG Juan1，ZHANG Cheng-hai2，WANG Min1 　　（1 China Pharmaceutical University， Nanjing 210009，Jiangsu，China；2.Shanghai CP Guojian，Shanghai 201203，China） 　　Abstract：Heavy-chain antibody （HCAb） lacking light chain exists naturally in camel. The variable domain of HCAb， the smallest functional antigen-binding fragment is referred to nanobody， which molecular weight is 15kD. They are well expressed and have a high stability and solubility. As a new type antibody in basic research， drug development and disease diagnosis ， nanobody has a broad application prospects. This mini-review offers an overview of its properties and therapeutic. 　　Key words：Heavy-chain antibody ；Nanobody ；Diagnose ；Therapy 　　由于在疾病诊断与治疗方面的广泛应用，近20年来重组抗体技术得到迅速的发展。常规抗体是由两条完全相同的重链和两条完全相同的轻链组成（图1a）。通过分子生物学的技术和手段，将抗体重链可变区和轻链可变区连接组成各种小分子抗体[1]如ScFv、Diabody（图1a），不仅保留了完整的抗原结合部位，而且具有较好的亲和力。但是，这些小分子抗体特别是多价形式的小分子抗体的表达很复杂。 　　骆驼体内存在的缺失轻链的抗体，只含有重链，因此又叫做重链抗体（图1b）。其N端结构域（VHH或者纳米抗体）能直接识别结合特异性抗原。VHH是可结合抗原的最小功能单位，其相对分子质量仅为传统抗体的1/10左右，大小为15kD，直径2.2nm，高度4.8nm，又被称作纳米抗体。目前，通过噬菌体，酵母和核糖体展示技术，从免疫，非免疫和半合成纳米抗体库[2-4]中筛选抗原特异性纳米抗体的方法已经建立。 　　图1 抗体的结构示意图 　　1纳米抗体的结构与性质 　　1.1纳米抗体的结构 纳米抗体只有一个结构域，没有Fc段，从而避免了Fc段引起的补体反应。与常规抗体的可变区相似，VHH包含4个框架区形成基本骨架，3个互补决定区是抗原结合的主要部位。与常规VH相比，VHH框架区序列的同源性高达80%[5]。 　　通过序列分析和结构解析，揭示了VHH具有一些独特的特征。VHH中位于FR2的4个氨基酸[6]（F37、E44、R45、G47）与VH中相同位置的氨基酸不一样。这几个在VH中是高度保守的疏水性氨基酸，而在VHH中是亲水性氨基酸，增加了VHH的水溶性。与常规抗体的VH相比，VHH的CDR1可变性更高，CDR3区更长，形成一个突出的环，较长的CDR3环与CDR1或FR2形成一个二硫键来稳定构象[7]。由于VHH只有一个结构域，比常规抗体小很多，所以在很多方面有广泛应用。 　　1.2热稳定性 1.3特异性 纳米抗体除了可以识别一些常规的表位外，由于其分子量很小，CDR3区较长，形成的环向外延伸，还可以识别常规抗体无法识别的抗原表位，例如酶的活性位点[10]和一些保守的凹陷的表位[11]。然而，一些半抗原和小分子多肽，通常结合在VH-VL的缝隙中，很难和VHH结合。 　　1.4组织渗透性 纳米抗体的分子量很小，很容易从肾小球滤过，导致VHH很快从血浆中清除，使VHH的半衰期很短。另外，VHH有很高的组织渗透作用，VHH很容易偶联一些毒素进入细胞