RP―HPLC同时测定山慈菇药材中dactylorhin A和militarine的含量.docVIP

RP―HPLC同时测定山慈菇药材中dactylorhin A和militarine的含量 　　[摘要]建立山慈菇药材中dactylorhin A和militarine的RP-HPLC含量测定方法，为山慈菇药材的质量标准研究提供依据。采用Alltech Prevail C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱（0 min，20∶80；30 min，55∶45；35 min，55∶45）。 流速为0.8 mL?min-1；检测波长为224 nm；柱温为30 ℃。dactylorhin A和militarine的线性范围分别为0.257～9.95 μg（r=0.999 8），0.128～10.27 μg（r=0.999 9）；平均回收率（n=9）分别为94.70%，102.8%，RSD分别为4.2%，4.9%。采用RP-HPLC测定来源于独蒜兰和云南独蒜兰的山慈菇药材中dactylorhin A和militarine的含量，该方法准确、重复性好，适用于来源于独蒜兰和云南独蒜兰的山慈菇药材的质量控制。 　　[关键词]山慈菇；RP-HPLC；dactylorhin A；militarine；含量测定 　　[收稿日期]2013-08-04 　　[基金项目]《中国药典》2010年版一部标准研究项目（YZ-205，YZ-206） 　　[通信作者]李帅，研究员，Tel：（010 E-mail： lishuai@imm.ac.cn 　　[作者简介]崔保松，研究实习员，主要研究方向为天然药物化学，Tel：（010E-mail：bscui@imm.ac.cn山慈菇为兰科植物杜鹃兰Cremastra appendiculata（D. Don）Makino、独蒜兰Pleione bulbocodioides（Franchise.）Rolfe或云南独蒜兰P.yunnanensis Rolfe的干燥假鳞茎。前者习称“毛慈菇”，后二者习称“冰球子”[1]。主要分布于云南、贵州、四川等长江以南各省区[2]。山慈菇具有清热解毒，消肿散结的功效，主要用于治疗瘰疬结核、咽喉肿痛等，在临床上通常作为抗癌中药配伍使用[3]。根据本课题组前期研究和部分文献调研的结果，从杜鹃兰[4-6]中发现了菲类化合物，联苄类化合物，萜类化合物等；独蒜兰[7]中发现了二氢菲及菲类化合物，联苄类化合物等；云南独蒜兰中发现了二氢菲类化合物[8]和二苯基衍生物（联苄类化合物）[9]。因此，菲类化合物和联苄类化合物是山慈菇药材中的主要特征性成分，活性研究结果表明[10]该类化合物具有一定的抗肿瘤细胞毒活性，可能是其具有抗癌作用的主要活性成分。但由于该类化合物在山慈菇药材中数量较多，含量较低，极性小，并且结构不稳定，在光照等条件下容易改变，不适合作为HPLC含量测定的指标成分。 　　根据前期对山慈菇不同来源品种的化学成分研究结果，发现双[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷（dactylorhin A）和双[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯（militarine）为来源于独蒜兰和云南独蒜兰的山慈菇药材的主要成分，经研究发现此类化合物是山慈菇中另外一类主要成分，即丁二酸苄酯苷类成分，研究发现此类化合物具有延缓衰老，改善衰老小鼠的学习记忆能力的作用[11-15]。因此选定这2个化学成分为山慈菇药材含量测定的指标成分，可以反映来源于独蒜兰和云南独蒜兰的山慈菇药材特征。 　　1材料 　　山慈菇药材，包括杜鹃兰、独蒜兰和云南独蒜兰 3个品种。经中国医学科学院药物研究所马林副研究员鉴定。 　　Agilent 1100高效液相色谱仪，包括DAD紫外检测器，ChemStation色谱工作站（Agilent 公司）；AB135-S/FACT型分析天平，1/10万（METTLER TOLEDO）；KQ-300DE型数控超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；色谱乙腈（BurdickJackson ACS/HPLC Certified）；娃哈哈纯净水。对照品dactylorhin A，militarine，自制，纯度达到98%以上，结构式见图1。 　　2方法与结果 　　2.1溶液的制备 　　2.1.1对照品溶液的制备精密称取dactylorhin 　　图1对照品dactylorhin A，militarine的结构式 　　Fig.1Structural formula of dactylorhin A， militarine 　　A， militarine对照品适量，用甲醇溶解，分别制成0.3，0.5 g ?L-1的溶液，即得对照品溶液。 　　2.1.2供