2.2.2-动物细胞融合与单克隆抗体解说.ppt

植物细胞A 植物细胞B 去细胞壁 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 正在融合的原生质体 杂种细胞 再生出 细胞壁 植物细胞融合 植物组织培养 脱分化 再分化 愈伤组织 杂种植物 筛选 植物体细胞杂交技术 一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 (一)动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 （二）动物细胞融合的过程 与植物原生质体融合的基本原理相同，方法类似。 动物细胞融合的过程 两个核的融合是在杂交细胞第一次有丝分裂时进行的 原理：细胞膜的流动性 1. 为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 P52 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂交细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 2. 过程 3. 不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 不能，因为不灭活的病毒会感染细胞。 动物细胞融合技术的发展简史 (三)动物细胞融合的意义 1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。 2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。 3.为制造单克隆抗体开辟了新途径。 鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、 人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡 、人—胡萝卜等 主要用于制备单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱导细胞融合 去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较 2. 抗体是由何种细胞产生的？ B淋巴细胞（浆细胞） 3. 抗体是如何产生的？ 4. 一个B淋巴细胞能产生几种抗体？ 每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 1.什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 抗原 动物体 抗体 刺激 浆细胞 二、单克隆抗体 7.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 克隆单一的Ｂ淋巴细胞，形成细胞群，提取分泌的抗体 6.这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 产量低，纯度低，特异性差 5.一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？ 动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上。 8.体外培养的B淋巴细胞能无限增殖吗? 不能 9. 我们学过的什么细胞具有这样的能力？ 癌细胞 10. 有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？ 细胞融合 一种B淋巴细胞：只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞：能够无限增殖 杂交细胞 创始人：米尔斯坦 柯勒 有几种融合方式呢？ ①B淋巴细胞间的融合； ②骨髓瘤细胞间的融合； ③B淋巴细胞与骨髓瘤细胞间的融合。 筛选 免疫小鼠 培养骨髓瘤细胞 融合 骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体 克隆杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞 单克隆抗体制备过程 多种杂交细胞 目的:获得能产生相应抗体的B淋巴细胞 常用灭活的病毒 ？种 BB 、 B瘤 、 瘤瘤 、 （选择培养基） 第一次筛选：获得杂交瘤细胞 第二次筛选：获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞特点：既能无限增殖，又能产生专一的抗体。 主要优点：特异性强、灵敏度高, 能大量制备。 从小鼠腹水中提取 从细胞培养液中提取 单克隆抗体的制备 思考： 1、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 3、制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ B淋巴细胞能产生单一抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不能产生单一抗体。这样融合成的杂交瘤细胞，既能无限增殖，又能产生专一的抗体。 2、植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 前者需去掉细胞壁，然后再融合；后者是两个体细胞直接融合。 P55 单克隆抗体的应用 １.作为诊断试剂（最广泛的用途）：准确识别各种抗原物质，并与抗原特异性结合 2.用于 运载药物：制成“生物导弹”治疗肿瘤 治疗疾病：主要用于癌症治疗 优点：准确、高效、简易、快速 优点:疗效高、毒副作用小 “生物导弹”＝单克隆抗体＋药物 （导向作用） 教学反馈 1.动物细胞融