九龙江大肠菌群测定.docVIP

九龙江水大肠菌群的测定 周晓芬 （漳州师范学院生物科学与技术系食品科学与工程 0座机电话号码） 【摘要】水中细菌菌落总数可作为判断被检水样被有机物污染程度的指标。细菌数量越多，则水中有机质含量越高。本实验应用多管发酵法测定水中细菌总数。再用革兰氏染色法鉴定细菌的种类。从而得出九龙江水中大肠菌群的近似值。 【关键词】细菌 菌落 大肠菌群 多管发酵法 革兰氏染色法 前言： 广义的细菌即为原核生物是指一大类细胞核无核膜包裹，只存在称作拟核区 或拟核 的裸露DNA的原始单细胞生物，包括真细菌和古生菌两大类群。人们通常所说的即为狭义的细菌，狭义的细菌为原核微生物的一类，是一类形状细短，结构简单，多以二分裂方式进行繁殖的原核生物，是在自然界分布最广、个体数量最多的有机体，是大自然物质循环的主要参与者。菌落由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有一定形态结构等特征的子细胞的群落。大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌most? probable? number），简称MPN表示。 1 材料与方法 1.1初步发酵试验 1.1.1 试验材料与用具 器材：试管、吸头（1ml、5ml）、冰箱、量筒、玻棒、烧杯、PH计、培养皿、水浴锅（箱）、培养箱、试剂瓶、电磁炉、显微镜、锥形瓶、接种环、干燥箱、汉德氏管、高压灭菌器、单道移液器、电子分析天平 培养基：乳糖胆盐蛋白胨 ， 伊红美蓝琼脂（EMB） 1.1.2操作步骤 （一）多管发酵（大肠菌群的测定） 1、水样的采集： 用高温灭菌过的试剂瓶到九龙江取水，将瓶子连瓶盖一起伸到10-15厘米的深处打开瓶塞，等水满后盖上盖子后从水中取出。运送水样时应避免玻璃瓶摇动，水样溢出后又流回瓶中，从而增加污染。 2、水样的稀释： 将灭菌的三根试管各装4.5ml的无菌水标上1、2、3的记号。充分振荡水样，从中吸取1ml于0.5号试管中，充分振荡即得1：1 0的稀释 液。同理配制1：100及1：1000稀释液。 3、水源水的检查 （1）初步发酵试验 在1个含有50ml 三倍浓缩的乳糖胆盐蛋白胨发酵烧瓶中，加入100ml 水样（轻度污染水的测定）。 在1支含有5ml 三倍浓缩乳糖胆盐蛋白胨发酵管中，各加入10ml 水样（中、轻度污染水的测定各一支）。 （2）从原水样、1:10、1:100、的稀释液各吸取1ml于4支经过灭菌的装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨中。（每吸取一次，吸头都要换一次。）原水样，1:10重复一次（中、轻度污染水的测定各一支）。 （3）将上述溶液混匀后，于36摄氏度培养24h，24h未产气的继续培养至48h。记录其稀释液的产气管数，进行复发酵试验。 （4）平板分离 经24h 培养后，将产酸产气及48h 产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18-24h，将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。 （5）复发酵试验 经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖胆盐蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1-3个，37℃培养24h，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表，即得大肠菌群数。 表1：大肠菌群检数表 严重污染水 接种水样量/ml 每升水样中 大肠菌群数 备注 1 0.1 0.01 0.001 － － － － 800 接种水样量为1.111 1,0.1,0.01,0.001个一份 － － － + 800 － － + － 800 － + － － 850 － － + + 1700 － + － + 1800 － + + － 2100 + － － － 2200 － + + + 2700 + － － + 9200 + － - － 9400 + － + + 17000 + + － － 23000 + + － + 95000 + + + － 238000 + + + + 238000 表2：大肠菌群检数表 中度污染水 接种水样量/ml 每升水样中 大肠菌群数 备注 10 1 0.1 0.01 － － － － 80 接种水样量为11.11 10,1,0.1,0.01个一份 － － － + 80 － － + － 80 － + － － 85 － － + + 170 － + －