薄层色谱法-补充.doc

薄层色谱法（TLC） 薄层色谱法概述： 薄层色谱法简称TLC，是在50年代从经典柱色谱法和纸色谱法基础上发展起来的一种色谱技术。60年代后，人们对薄层色谱法的标准化、规范化及扩大应用等方面进行了许多工作，使该方法日趋成熟。 薄层色谱法工作的过程是这样的： 首先将要分离的混合物点在用固定相均匀涂布的薄板的一端； 然后将薄板的这一端浸入流动相，在流动相浸湿薄板的过程中，样品随着流动相被展开，不同的组分随流动相以不同的速度向前移动，最终保留在薄板上的不同位置，从而达到分离的目的； 再用适当的方法对不同的组分进行检测，就可以定性或定量的对样品作出分析。 此时的固定相被称为载体或吸附剂，而流动相被称为展开剂，被展开的样品叫做斑点。 薄层色谱的特点： 灵敏度及分辨率高、分离快速、操作方便、同时分离多个样品、样品预处理简单、设备简单。由于这些特点，薄层色谱在实际工作中的应用十分广泛。 由于通常用薄层色谱分析法进行定量分析的过程中，薄层扫描仪是最为重要的，因此对它进行略详的介绍。 薄层扫描仪的基本结构及主要功能基本是相同的，每台仪器都包括光源、分光器、检测器、数据处理及信号输出几个部分。 典型的检测方法是吸收检测法，其基本测定原理为，用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上进行整个斑点或被斑点反射的光束，根据光束被斑点吸收后强度的变化来确定组分的含量。 薄层色谱法的优点特别适合我国国情，已成为许多实验室不可缺少的分离手段。该方法在科研、教学、临床、生产等各个领域中广泛应用，分离对象也无所不包。 目前它正向联用的方向发展，如薄层色谱--气相色--质谱联用，或都薄层色谱--红外光谱等的联用。 医药工业 薄层色谱在医药工业中有很广泛的应用，特别应用在中草药、中成药的成分分析和合成药物分析。 临床医学 在临床医学中，它主要用于对生物样品和有毒的物质进行分析。 环境科学 薄层色谱可以用来进行农药及农药残留分析，或都对有毒金属、多环芳烃进行检测。 食品化学 食品添加剂的安全性问题已婚经越来越多的得到关注，用薄层色谱对食品添加剂进行分析是一种简单有效的方法。 化学化工 薄层色谱在化学、化工方面也有很多应用，例如对高分子材料的助剂、填料等进行分析。 1.方法原理 薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻璃板或铝、塑料等片材为载体的多孔吸附剂薄层的固定相上,利用流动相在特定的展开室中将混合物中的组份推移到不同距离处，在色谱展开整个过程中，样品的成份受到正反不同的力的作用。 1 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。 2 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - （诱导） - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。 由于样品组份与流动相和固定相之间的相互作用力程度不同，整个毛细管流动过程中分离运动都在进行。基于这点，TLC系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。 用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。色谱可用肉眼或使用光密度计和照相机记录或影像系统方法来评价。 薄层板 2.1手工自制板 2.1.1玻璃板的要求:用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁、平整，最好使用厚薄1~2mm的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃板需洗净至不挂水，晾干，贮存于干燥洁净处备用。玻璃板反复使用时，应注意经常用洗液及碱液清洗，保持玻璃板面的光洁是保证薄层板质量的最基本要求 2.1.2制作方法:除另有规定外，将1份吸附剂加适量的水（如1份硅胶G一般加3份水），在研钵中用研杵沿一个方向小心研磨至成均匀的有适当粘稠度的胶浆,立即倾入涂布器中,均匀地向前推进涂布在玻璃板上;或按照不同涂布器的规定操作涂布;涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干,再在规定的温度 一般为105℃~110℃ 下烘约30分钟活化,贮于干燥器中备用。薄层板的厚度一般为0.25~0.5mm.。 2.2 商品化供应的预制板和高效板 2.2.1板的尺寸 20x20cm 10x20cm 20x10cm 10x10cm 图1 不同的板尺寸 TLC/HPTLC预制板有不同的规格供应。常用的尺寸为20 x 20，10 x 20，20 x 10，或10 x 10 cm。使用的规格取决于TLC或HPTLC的类别和样品的数目。 TLC/HPTLC板的预洗及活化 一般来说，色谱板应用溶剂如氯仿-甲醇 8:2 ，甚至用更强的洗脱溶剂的混合物进行预洗。具体操作可通过空白色谱展开来实现。 色谱板预洗完后,应在105 C加热1小时进行干燥，再在室温下置放至少2小时（需采取保护措施以防止实验室空气中的污染物重新附着在其上面，如放置在空的干燥器中）。 3. 样品点样 3．1点状点样和条带状点样 每次点样前，TLC/