MTT法测定棉酚对多浪羊淋巴细胞生长的影响.docVIP

MTT法测定棉酚对多浪羊淋巴细胞生长的影响 　　摘要：通过MTT法测定棉酚对多浪羊淋巴细胞生长的影响，确定棉酚对多浪羊淋巴细胞产生影响的最短作用时间和最低浓度，用于指导生产实践。从新疆多浪羊外周血分离淋巴细胞，将其加入10 mL的 RPMI-1640中，均匀加入96孔细胞培养板中，于CO2 培养箱中37 ℃培养12 h后，分别以不同浓度（5、10、15、20、25、30、35 μmol/L）的棉酚进行作用，作用时间分别为1、2、3、4、5、6 h，加入MTT培养4 h，加入DMSO溶液终止反应，用酶联免疫检测仪于490 nm处检测各孔的吸光值。结果表明，随着棉酚作用浓度及作用时间的递增，多浪羊淋巴细胞活性在逐渐下降，说明棉酚对多浪羊的淋巴细胞活性有明显的抑制作用。 　　关键词：MTT；棉酚；新疆多浪羊；淋巴细胞；影响 　　中图分类号：S816.43 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）05-1098-04 　　The Effect of Gossypol on Lymphocyte Growth of Duolang Sheep by MTT 　　WANG Juan-juana，JIA Shan-linga，WAN Xin-junb，LI Lian-ruib 　　（Tarim University， a.College of Life Science； b.College of Animal Science， Alar 843300， Xinjiang，China） 　　Abstract： The effect of gossypol on the growth of Duolang sheep lymphocyte was detected by MTT assay. The object was to determine the shortest time and lowest concentration of gossypol on lymphocyte， and then used to practice. The lymphocyte was isolated from the peripheral blood of Xinjiang Duolang sheep， then added into 10 mL RPMI-1640 and even allocated to 96-well cell culture plate. After cultured in CO2 incubator at 37 ℃ for 12 h， the lymphocytes were treated with gossypol of different concentrations （5， 10， 15， 20， 25， 30， 35 μmol/L） for 1， 2， 3， 4， 5， 6 h， and then added MTT to culture 4 h. At last the reaction was stopped by adding DMSO solution. The absorbance of each well was detected by ELISA at OD490 nm . The results showed that the activity of Duolang sheep lymphocytes decreased with the increase of gossypol concentration and acting time. It indicated that gossypol had obvious inhibitory effect on the Xinjiang Duolang sheep lymphocytes. 　　Key words： MTT； gossypol； Xinjiang Duolang sheep； lymphocyte； effect 　　棉酚（Gossypol，GL）存在于锦葵科某些植物的根、茎、种子中，曾作为男性节育药为人们所熟知[1]。研究表明，棉酚还是一种新型的抗实体瘤药物[2]，化学结构为8，8′-二醛基-1，1，6，6′，7，7′-六羟基-5，5′-二异丙基-3，3′-二甲基-2，2′联萘，相对分子质量为518.54[3]，棉酚制剂主要有3种，分别为醋酸棉酚、精制棉酚及甲酸棉酚。棉酚具有明显的诱导肿瘤细胞凋亡的能力[4，5]。据统计，2010年新疆棉花产量为260万t，约占全国棉花总产量的40%，世界棉花总产量的11%。根据俄罗斯农业科学院有机化学研究所的一个科学小组研究发现，以往被人们认为废弃物的棉花的