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Clostridium ljungdahlii菌种发酵实验工作计划 一、菌种活化 菌种活化包含两步。首先是菌种复苏，就是使处于保藏（休眠）状态的菌种苏醒过来，恢复在一定培养条件下的生长代谢能力；活化是在菌种复苏的基础上，通过在适宜的培养基和培养条件下进行连续传代培养来恢复和增强菌种的活力。实际上菌种活化过程就是菌种复壮的过程，菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化,让菌种逐渐适应培养环境80℃ 冰箱冻结法。从冰箱中取出冻存管，立即放置38-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止，约需50秒-100秒。开启冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养总菌种活化需要以下几个步骤配置菌种适宜生长的培养基将冷冻的菌种解冻菌种从保藏状态恢复到室温状态将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落过这四个步骤就到达将菌种从保藏状态活化的目的复壮判断 ①生化指标可以通过其过程中某些中间代谢物的产量作为指标或者是这个菌株产生的酶或者是这个菌株产生的次生代谢物。 生理指标：菌株如果复壮，他的生长量就会恢复到原来的水平或者更高。 特殊：能够利用特殊物质作为生长必须物质的菌株，比如菌株能够可以进行培养，判断其是否。使优良菌种的性状保持稳定，人为地创造条件，使菌种的新陈代谢活动处于不活泼状态，即选取优良菌种的休眠体（孢子或芽孢）或富有生命力的悬浮液在低温或脱水状态下保存。简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液4冰箱保存,保存时间不超过1～2个月；液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35时，即可置于-150～-196的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管内于-20～-30的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作的种子。